Cell Direct RT qPCR Kit — Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready ერთსაფეხურიანი qRT-PCR კომპლექტების ზონდი
აღწერილობები
ეს პროდუქტი იყენებს უნიკალურ ლიზის ბუფერულ სისტემას რნმ-ის სწრაფად გასათავისუფლებლად კულტივირებული უჯრედის ნიმუშებიდან RT-qPCR რეაქციებისთვის, რაც გამორიცხავს რნმ-ს შრომატევადი და შრომატევადი გაწმენდის პროცესს და მხოლოდ 7 წუთს საჭირო რნმ-ის შაბლონის მისაღებად, 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman-ის მიერ მოწოდებული რეალურ დროში და ეფექტური kit-ით.
5× Direct RT Mix-ს და 2× Direct qPCR Mix-Taqman-ს აქვს ინჰიბიტორების ძლიერი ტოლერანტობა და შეუძლია შეასრულოს ეფექტური შებრუნება და სპეციფიკური გაძლიერება შაბლონად გასაზომი ნიმუშის ლიზატის გამოყენებით.რეაგენტი შეიცავს Foregene საპირისპირო ტრანსკრიპტაზას, Hot D-Taq დნმ პოლიმერაზას, dNTPs, MgCl2, რეაქციის ბუფერი, PCR ოპტიმიზატორი და სტაბილიზატორი, რომელიც შეიძლება გამოყენებულ იქნას ლიზის ბუფერთან ერთად ნიმუშების სწრაფად და მარტივად გამოსავლენად და აქვს მაღალი მგრძნობელობის, სპეციფიკურობისა და სტაბილურობის მახასიათებლები.
სპეციფიკაციები
200×20μლ Rxns, 1000×20μლ Rxns
ნაკრების კომპონენტები
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| ნაკრების კომპონენტები 20 μl qPCR რეაქციის სისტემა | DRT-01021 | DRT-01022 | შენიშვნა | |
| 200 ტ | 1000 ტ | |||
|
ნაწილი I | ბუფერი CL | 4 მლ | 20 მლ | უჯრედის ლიზისი |
| Foregene Protease Plus II | 80 მლ | 400 მლ | ||
| ბუფერი ST | 400 მლ | 1 მლ × 2 | ||
|
ნაწილი II | დნმ-ის საშლელი | 80 მლ | 400 მლ | |
| 5×Direct RT Mix * | 160 მლ | 800 მლ | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman * | 1 მლ × 2 | 1.7 მლ × 6 | qPCR | |
| 20×ROX სარეფერენტო საღებავი | 40 მლ | 200 მლ | ||
| RNase-ის გარეშე ddH2O | 1,7 მლ | 10 მლ | ||
| Ინსტრუქციის სახელმძღვანელო | 1 ნაჭერი | 1 ნაჭერი | ||
*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman შესაძლებელია ცალკე შეძენა
მახასიათებლები და უპირატესობები
■მარტივი და ეფექტური: Cell Direct RT ტექნოლოგიით, რნმ-ის ნიმუშების მიღება შესაძლებელია მხოლოდ 7 წუთში.
■ ნიმუშის მოთხოვნა მცირეა, შესაძლებელია 10 უჯრედის ტესტირება.
■ მაღალი გამტარუნარიანობა: მას შეუძლია სწრაფად აღმოაჩინოს რნმ უჯრედებში, რომლებიც კულტივირებულია 384, 96, 24, 12, 6 ჭაბურღილის ფირფიტებში.
■ დნმ-ის საშლელს შეუძლია სწრაფად ამოიღოს გამოთავისუფლებული გენომები, მნიშვნელოვნად შეამციროს გავლენა შემდგომ ექსპერიმენტულ შედეგებზე.
■ ოპტიმიზებული RT და qPCR სისტემა ხდის ორეტაპიან RT-PCR საპირისპირო ტრანსკრიფციას უფრო ეფექტურს და PCR-ს უფრო სპეციფიკურს და უფრო გამძლეს RT-qPCR რეაქციის ინჰიბიტორების მიმართ.
ნაკრების აპლიკაცია
გამოყენების სფერო: კულტივირებული უჯრედები.
- ნიმუშის ლიზისით გამოთავისუფლებული რნმ: გამოიყენება მხოლოდ ამ ნაკრების RT-qPCR შაბლონზე.
- ნაკრების გამოყენება შესაძლებელია შემდეგი მიზნებისთვის: გენის ექსპრესიის ანალიზი, siRNA-ს შუამავლობით გენის გამაჩუმებელი ეფექტის შემოწმება, წამლების სკრინინგი და ა.შ.
შენახვა და შენახვის ვადა
ამ ნაკრების I ნაწილი უნდა ინახებოდეს 4-ზე℃;II ნაწილი უნდა ინახებოდეს -20℃ ტემპერატურაზე.
Foregene Protease Plus II უნდა ინახებოდეს 4-ზე℃, არ გაყინოთ -20℃.
რეაგენტი 2×Direct qPCR Mix-Taqman უნდა ინახებოდეს -20-ზე℃სიბნელეში;თუ ხშირად გამოიყენება, ის ასევე შეიძლება შენახული იყოს 4-ზე℃ მოკლევადიანი შენახვისთვის (გამოიყენება 10 დღის განმავლობაში).
რეალურ დროში PCR პრაიმერის დიზაინის პრინციპები
Forward Primer და Reverse Primer
Real Time PCR-სთვის პრაიმერის დიზაინი ძალიან მნიშვნელოვანია.პრაიმერები დაკავშირებულია PCR გაძლიერების სპეციფიკასთან და ეფექტურობასთან და შეიძლება შეიქმნას შემდეგი პრინციპების მიხედვით:
- პრაიმერის სიგრძე: 18-30bp.
- GC შემცველობა: 40-60%.
- Tm მნიშვნელობა: პრაიმერის დიზაინის პროგრამულ უზრუნველყოფას, როგორიცაა Primer 5, შეუძლია პრაიმერის Tm მნიშვნელობა მისცეს.ზედა და ქვედა დინების პრაიმერების Tm მნიშვნელობები უნდა იყოს რაც შეიძლება ახლოს.ასევე შეიძლება გამოყენებულ იქნას Tm გამოთვლის ფორმულა: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).PCR-ის ჩატარებისას, პრაიმერის Tm მნიშვნელობის 5 °C-ზე დაბალი ტემპერატურა, როგორც წესი, შეირჩევა ანეილირების ტემპერატურად (შედუღების ტემპერატურის შესაბამისმა ზრდამ შეიძლება გაზარდოს PCR რეაქციის სპეციფიკა).
- პრაიმერი და PCR პროდუქტები:
- დიზაინის პრაიმერის PCR გამაძლიერებელი პროდუქტის სიგრძე სასურველია იყოს 100-150bp.
- შეძლებისდაგვარად თავიდან უნდა იქნას აცილებული დიზაინის პრაიმერები შაბლონის მეორად სტრუქტურულ ზონაში.
- მოერიდეთ 2 ან მეტი დამატებითი ფუძის წარმოქმნას ზედა და ქვედა დინების პრაიმერების 3' ბოლოებს შორის.
- პრაიმერის 3' ტერმინალის ბაზა არ შეიძლება იყოს 3 დამატებითი თანმიმდევრული G ან C.
- თავად პრაიმერებს არ შეიძლება ჰქონდეთ დამატებითი სტრუქტურები, წინააღმდეგ შემთხვევაში წარმოიქმნება თმის სამაგრი სტრუქტურა, რაც გავლენას მოახდენს PCR გაძლიერებაზე.
- ATCG უნდა განაწილდეს რაც შეიძლება თანაბრად პრაიმერის თანმიმდევრობით და 3' ტერმინალური ბაზა თავიდან უნდა იქნას აცილებული, როგორც T.
დანართი1: Cell პირდაპირიRT-qPCR ნაკრების კომპონენტიt დანამატის პაკეტი
1.უჯრედის ლიზისის ხსნარი
| უჯრედის ლიზისის ხსნარი | |||
| ნაკრების კომპონენტები (24 ჭაბურღილის ლიზის სისტემა / ჭა) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ტ | 500 ტ | ||
| ნაწილიმე | ბუფერი CL | 20 მლ | 100 მლ |
| Foregene Protease Plus II | 400 მლ | 1 მლ × 2 | |
| ბუფერი ST | 1 მლ × 2 | 10 მლ | |
| ნაწილიII | დნმ-ის საშლელი | 400 მლ | 1 მლ × 2 |
| RT მიქსი | |
| ნაკრების კომპონენტები (20 მლ რეაქციის სისტემა) | DRT-01011-B1 |
| 200 ტ | |
| 5× პირდაპირი RT მიქსი | 800 მლ |
| RNase-ის გარეშე ddH2O | 1.7 მლ × 2 |
| qPCR Mix | ||
| ნაკრების კომპონენტები (20 მლ რეაქციის სისტემა) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 ტ | 1000 ტ | |
| 2× პირდაპირი qPCR Mix-Taqman | 1 მლ × 2 | 1.7 მლ × 6 |
| 20× ROX Reference საღებავი | 40 მლ | 200 მლ |
| RNase-ის გარეშე ddH2O | 1,7 მლ | 10 მლ |
ინსტრუქციის სახელმძღვანელოები:
