ძირითადი მოლეკულური ბიოლოგიის ტერმინების ახსნა
1. cDNA და cccDNA: cDNA არის ორჯაჭვიანი დნმ, რომელიც სინთეზირებულია mRNA-დან საპირისპირო ტრანსკრიპტაზას მიერ;cccDNA არის პლაზმიდური ორჯაჭვიანი დახურული წრიული დნმ, რომელიც თავისუფალია ქრომოსომისგან.
2. სტანდარტული დასაკეცი ერთეული: ცილის მეორადი სტრუქტურის ერთეულს α-სპირალი და β-ფურცელი შეუძლია შექმნას სტრუქტურული ბლოკები სპეციალური გეომეტრიული განლაგებით სხვადასხვა შემაერთებელი პოლიპეპტიდების მეშვეობით.ამ ტიპის განსაზღვრულ დასაკეცს ჩვეულებრივ სუპერმეორადი სტრუქტურას უწოდებენ.თითქმის ყველა მესამეული სტრუქტურა შეიძლება აღწერილი იყოს ამ დასაკეცი ტიპებით და მათი კომბინირებული ტიპებითაც კი, ამიტომ მათ ასევე უწოდებენ სტანდარტულ დასაკეცი ერთეულებს.
3. CAP: ციკლური ადენოზინმონოფოსფატი (cAMP) რეცეპტორული ცილა CRP (cAMP რეცეპტორული ცილა), cAMP-ისა და CRP-ის კომბინაციის შემდეგ წარმოქმნილ კომპლექსს ეწოდება აქტივაციის პროტეინი CAP (cAMP activated protein).
4. პალინდრომული თანმიმდევრობა: დნმ-ის ფრაგმენტის სეგმენტის საპირისპირო დამატებითი თანმიმდევრობა, ხშირად შემაკავებელი ფერმენტის ადგილი.
5. მიკრორნმ: დამატებითი ინტერფერენციული რნმ ან ანტისენსიური რნმ, რომელიც ავსებს mRNA თანმიმდევრობას და შეუძლია შეაფერხოს mRNA-ს ტრანსლაცია.
6. რიბოციმი: კატალიზური აქტივობის მქონე რნმ, რომელიც ასრულებს ავტოკატალიტიკურ როლს რნმ-ის შერწყმის პროცესში.
7. მოტივი: ცილის მოლეკულების სივრცულ სტრუქტურაში არის რამდენიმე ადგილობრივი რეგიონი მსგავსი სამგანზომილებიანი ფორმისა და ტოპოლოგიით.
8. სასიგნალო პეპტიდი: პეპტიდი 15-36 ამინომჟავის ნარჩენებით ცილის სინთეზის დროს N-ბოლოზე, რომელიც ხელმძღვანელობს ცილის ტრანსმემბრანას.
9. ატენუატორი: ნუკლეოტიდური თანმიმდევრობა ოპერატორის რეგიონსა და სტრუქტურულ გენს შორის, რომელიც წყვეტს ტრანსკრიფციას.
10. ჯადოსნური ლაქა: როდესაც ბაქტერია იზრდება და ამინომჟავების სრულ ნაკლებობას წააწყდება, ბაქტერიები გამოიმუშავებენ სასწრაფო პასუხს, რათა შეაჩერონ ყველა გენის ექსპრესია.სიგნალები, რომლებიც წარმოქმნის ამ გადაუდებელ რეაქციას, არის გუანოზინის ტეტრაფოსფატი (ppGpp) და გუანოზინის პენტაფოსფატი (pppGpp).PpGpp-ისა და pppGpp-ის როლი არ არის მხოლოდ ერთი ან რამდენიმე ოპერონი, არამედ გავლენას ახდენს მათ დიდ რაოდენობაზე, ამიტომ მათ სუპერრეგულატორები ან ჯადოსნური ლაქები ეწოდება.
11. ზემოთ პრომოტორული ელემენტი: ეხება დნმ-ის თანმიმდევრობას, რომელიც ასრულებს მარეგულირებელ როლს პრომოტორის აქტივობაში, როგორიცაა TATA -10 რეგიონში, TGACA -35 რეგიონში, გამაძლიერებლები და ატენუატორები.
12. დნმ-ის ზონდი: დნმ-ის მარკირებული სეგმენტი ცნობილი თანმიმდევრობით, რომელიც ფართოდ გამოიყენება უცნობი თანმიმდევრობებისა და სამიზნე გენების გამოსავლენად.
13. SD თანმიმდევრობა: ეს არის რიბოზომისა და mRNA-ს შემაკავშირებელი თანმიმდევრობა, რომელიც არეგულირებს ტრანსლაციას.
14. მონოკლონური ანტისხეული: ანტისხეული, რომელიც მოქმედებს მხოლოდ ერთი ანტიგენური დეტერმინანტის წინააღმდეგ.
15. კოსმიდი: ეს არის ხელოვნურად აგებული ეგზოგენური დნმ-ის ვექტორი, რომელიც ინარჩუნებს COS რეგიონებს ფაგის ორივე ბოლოში და უკავშირდება პლაზმიდს.
16. ცისფერ-თეთრი ლაქების სკრინინგი: LacZ გენი (ბ-გალაქტოზიდაზას კოდირება), ფერმენტს შეუძლია დაშალოს ქრომოგენული სუბსტრატი X-gal (5-ბრომო-4-ქლორო-3-ინდოლ-β-D-გალაქტოზიდი) და წარმოქმნას ლურჯი, რითაც შტამი გახდება ლურჯი.როდესაც ეგზოგენური დნმ არის ჩასმული, LacZ გენის გამოხატვა შეუძლებელია და შტამი თეთრია, რათა მოხდეს რეკომბინანტული ბაქტერიების სკრინინგი.ამას ლურჯ-თეთრ სკრინინგს უწოდებენ.
17. ცის-მოქმედი ელემენტი: დნმ-ში ფუძეების სპეციფიკური თანმიმდევრობა, რომელიც არეგულირებს გენის ექსპრესიას.
18. Klenow ფერმენტი: დნმ პოლიმერაზა I-ის დიდი ფრაგმენტი, გარდა იმისა, რომ 5'3' ეგზონუკლეაზას აქტივობა ამოღებულია დნმ პოლიმერაზა I ჰოლოენზიმიდან.
19. ანკორირებული PCR: გამოიყენება საინტერესო დნმ-ის გასაძლიერებლად ცნობილი თანმიმდევრობით ერთ ბოლოზე.პოლი-dG კუდი დაემატა უცნობი თანმიმდევრობის ერთ ბოლოს, შემდეგ კი პოლი-dC და ცნობილი თანმიმდევრობა გამოიყენეს, როგორც პრაიმერები PCR გაძლიერებისთვის.
20. შერწყმული ცილა: ევკარიოტული ცილის გენი დაკავშირებულია ეგზოგენურ გენთან, ხოლო ცილა, რომელიც შედგება ორიგინალური გენის ცილის და ეგზოგენური ცილის ტრანსლაციისგან, ერთდროულად გამოხატულია.
მოლეკულური ბიოლოგიის სხვა ტერმინები
1. დნმ-ის ფიზიკური რუკა არის დნმ-ის მოლეკულის (რესტრიქციული ენდონუკლეაზას მიერ მონელებული) ფრაგმენტების განლაგება.
2. RNase-ის დაშლა იყოფა ორ ტიპად (ავტოკატალიზი) და (ჰეტეროკატალიზი).
3. პროკარიოტებში სამი დაწყების ფაქტორია (IF-1), (IF-2) და (IF-3).
4. ტრანსმემბრანული ცილები საჭიროებენ ხელმძღვანელობას (სიგნალის პეპტიდები), ხოლო ცილოვანი ჩაპერონების როლი არის (ხელს უწყობს პეპტიდური ჯაჭვის დაკეცვას ცილის ბუნებრივ კონფორმაციაში).
5. პრომოტორების ელემენტები ზოგადად შეიძლება დაიყოს ორ ტიპად: (ძირითადი პრომოტორული ელემენტები) და (ზედა დინების პრომოუტერი ელემენტები).
6. მოლეკულური ბიოლოგიის კვლევის შინაარსი ძირითადად მოიცავს სამ ნაწილს: (სტრუქტურული მოლეკულური ბიოლოგია), (გენის გამოხატულება და რეგულაცია) და (დნმ-ის რეკომბინაციის ტექნოლოგია).
7. ორი ძირითადი ექსპერიმენტი, რომელიც აჩვენებს, რომ დნმ არის გენეტიკური მასალა, არის (თაგვების პნევმოკოკური ინფექცია) და (Escherichia coli-ის T2 ფაგის ინფექცია).პოტენციალი).
8. hnRNA-სა და mRNA-ს შორის ორი ძირითადი განსხვავებაა: (hnRNA იჭრება mRNA-ში გარდაქმნის პროცესში), (mRNA-ს 5' ბოლო ემატება m7pGppp თავსახურით და არის დამატებითი პოლიადენილაცია mRNA მჟავას (პოლიA) კუდის 3' ბოლოში).
9. ცილის მრავალქვეგანყოფილებიანი ფორმის უპირატესობებია (ქვეგანყოფილება დნმ-ის უტილიზაციის ეკონომიური მეთოდია), (შეიძლება შეამციროს ცილის სინთეზის შემთხვევითი შეცდომების გავლენა ცილის აქტივობაზე), (აქტივობა შეიძლება იყოს ძალიან ეფექტურად და სწრაფად იხსნება და იხურება).
10. ცილის დაკეცვის მექანიზმის ძირითადი შინაარსი პირველი ნუკლეაციის თეორია მოიცავს (ბირთვება), (სტრუქტურული გამდიდრება), (საბოლოო გადაწყობა).
11. გალაქტოზას აქვს ორმაგი ეფექტი ბაქტერიებზე;ერთის მხრივ (ის შეიძლება გამოყენებულ იქნას როგორც ნახშირბადის წყარო უჯრედების ზრდისთვის);მეორეს მხრივ (ის ასევე არის უჯრედის კედლის კომპონენტი).ამიტომ, ფონურ დონეზე მუდმივი სინთეზისთვის საჭიროა cAMP-CRP-დამოუკიდებელი პრომოტორი S2;ამავდროულად, cAMP-CRP-დამოკიდებული პრომოტორი S1 საჭიროა მაღალი დონის სინთეზის დასარეგულირებლად.ტრანსკრიფცია იწყება (S2)-დან G-ით და (S1-დან) G-ის გარეშე.
12. რეკომბინანტული დნმ ტექნოლოგია ასევე ცნობილია როგორც (გენის კლონირება) ან (მოლეკულური კლონირება).საბოლოო მიზანია (ერთი ორგანიზმის გენეტიკური ინფორმაციის დნმ-ის გადატანა მეორე ორგანიზმში).ტიპიური დნმ-ის რეკომბინაციის ექსპერიმენტი ჩვეულებრივ მოიცავს შემდეგ საფეხურებს: (1) ამოიღეთ დონორი ორგანიზმის სამიზნე გენი (ან ეგზოგენური გენი) და ფერმენტულად დააკავშირეთ იგი სხვა დნმ-ის მოლეკულასთან (კლონირების ვექტორთან) ახალი რეკომბინანტული დნმ-ის მოლეკულის შესაქმნელად.② რეკომბინანტული დნმ-ის მოლეკულა გადადის მიმღებ უჯრედში და მრავლდება მიმღებ უჯრედში.ამ პროცესს ტრანსფორმაცია ეწოდება.③ შეამოწმეთ და დაადგინეთ ის მიმღები უჯრედები, რომლებმაც შთანთქა რეკომბინანტული დნმ.④ გაამრავლეთ უჯრედები, რომლებიც შეიცავს რეკომბინანტულ დნმ-ს დიდი რაოდენობით, რათა დაადგინოთ არის თუ არა უცხო დამხმარე გენი გამოხატული.
13. არსებობს პლაზმიდების რეპლიკაციის ორი ტიპი: მათ, რომლებსაც მკაცრად აკონტროლებენ მასპინძელი უჯრედის ცილის სინთეზი, ეწოდება (მჭიდრო პლაზმიდები), ხოლო მათ, რომლებსაც მკაცრად არ აკონტროლებენ მასპინძელი უჯრედის ცილის სინთეზი, ეწოდება (მოდუნებული პლაზმიდები).
14. PCR რეაქციის სისტემას უნდა ჰქონდეს შემდეგი პირობები: ა.დნმ-ის პრაიმერები (დაახლოებით 20 ბაზა) დამატებითი თანმიმდევრობით გასაყოფი სამიზნე გენის ორი ჯაჭვის თითოეულ ბოლოში.ბ.თერმული სტაბილურობის მქონე ფერმენტები, როგორიცაა: TagDNA პოლიმერაზა.c, dNTPd, საინტერესო დნმ-ის თანმიმდევრობა შაბლონად
15. PCR-ის ძირითადი რეაქციის პროცესი მოიცავს სამ ეტაპს: (დენატურაცია), (ანილირება) და (გაფართოება).
16. ტრანსგენური ცხოველების ძირითადი პროცესი ჩვეულებრივ მოიცავს: ①კლონირებული უცხო გენის შეყვანას განაყოფიერებული კვერცხუჯრედის ან ემბრიონის ღეროვანი უჯრედის ბირთვში;② განაყოფიერებული კვერცხუჯრედის ან ემბრიონის ღეროვანი უჯრედის გადანერგვა ქალის საშვილოსნოში;③ ემბრიონის სრული განვითარება და ზრდა უცხო გენების მქონე შთამომავლებისთვის;④ გამოიყენეთ ეს ცხოველები, რომლებსაც შეუძლიათ უცხო ცილების წარმოქმნა, როგორც სანაშენე მარაგი ახალი ჰომოზიგოტური ხაზების გასამრავლებლად.
17. ჰიბრიდომის უჯრედული ხაზები წარმოიქმნება (ელენთა B) უჯრედების ჰიბრიდიზაციით (მიელომა) უჯრედებთან და ვინაიდან (ელენთა უჯრედებს) შეუძლიათ გამოიყენონ ჰიპოქსანტინი და (ძვლის უჯრედები) უზრუნველყონ უჯრედების გაყოფის ფუნქციები, ისინი შეიძლება გაიზარდოს HAT გარემოში.იზრდება.
18. კვლევის გაღრმავებასთან ერთად პირველი თაობის ანტისხეულებს ეწოდება (პოლიკლონური ანტისხეულები), მეორე თაობის (მონოკლონური ანტისხეულები), მესამე თაობის (გენეტიკური ინჟინერიის ანტისხეულები).
19. დღეისათვის მწერების ვირუსების გენეტიკური ინჟინერია ძირითადად ორიენტირებულია ბაკულოვირუსზე, რაც გამოიხატება (ეგზოგენური ტოქსინის გენის) შეყვანაში;(გენები, რომლებიც არღვევენ მწერების ცხოვრების ნორმალურ ციკლს);(ვირუსის გენების მოდიფიკაცია).
20. ტრანს-მოქმედი ცილოვანი ფაქტორები, რომლებიც შეესაბამება საერთო ელემენტებს TATA, GC და CAAT ძუძუმწოვრების რნმ პოლიმერაზა II პრომოტორში არის (TFIID), (SP-1) და (CTF/NF1), შესაბამისად.
ოცდაერთი.რნმ პოლიმერაზას Ⅱ ძირითადი ტრანსკრიფციის ფაქტორებია TFⅡ-A, TFⅡ-B, TFII-D, TFⅡ-E და მათი შემაკავშირებელი თანმიმდევრობაა: (D, A, B, E).სადაც TFII-D ფუნქციაა (ავალდებულებს TATA ყუთს).
ოცდაორი.ტრანსკრიფციის ფაქტორების უმეტესობა, რომლებიც აკავშირებს დნმ-ს, მუშაობს დიმერების სახით.ტრანსკრიფციის ფაქტორების ფუნქციური დომენები, რომლებიც აკავშირებენ დნმ-ს, ჩვეულებრივ არის შემდეგი (სპირალი-მობრუნება-სპირალი), (თუთიის თითის მოტივი), (საბაზისო-ლეიცინის) ელვარე მოტივი).
ოცდასამი.არსებობს სამი ტიპის შეზღუდვის ენდონუკლეაზას გაყოფის რეჟიმი: (გაჭრა სიმეტრიის ღერძის 5' მხარეს 5' წებოვანი ბოლოების წარმოქმნით), (გაჭრა სიმეტრიის ღერძის 3' მხარეს 3' წებოვანი ბოლოების შესაქმნელად (სიმეტრიის ღერძზე გაჭრა ბრტყელი სეგმენტების წარმოქმნით) ).
ოცდაოთხი.პლაზმიდურ დნმ-ს აქვს სამი განსხვავებული კონფიგურაცია: (SC კონფიგურაცია), (oc კონფიგურაცია), (L კონფიგურაცია).ელექტროფორეზში პირველია (SC კონფიგურაცია).
25. ეგზოგენური გენის გამოხატვის სისტემები, ძირითადად (Escherichia coli), (საფუარი), (მწერი) და (ძუძუმწოვრების უჯრედების ცხრილი).
26. ტრანსგენური ცხოველებისთვის ყველაზე ხშირად გამოყენებული მეთოდებია: (რეტროვირუსული ინფექციის მეთოდი), (დნმ მიკროინექციური მეთოდი), (ემბრიონული ღეროვანი უჯრედების მეთოდი).
განაცხადის მოლეკულური ბიოლოგია
1. დაასახელეთ 5-ზე მეტი რნმ-ის ფუნქციები?
გადაცემის რნმ tRNA გადაცემის ამინომჟავა რიბოზომის რნმ rRNA რიბოსომა წარმოადგენს მესინჯერ რნმ mRNA პროტეინის სინთეზის შაბლონს ჰეტეროგენული ბირთვული რნმ hnRNA მომწიფებული mRNA მცირე ბირთვული რნმ სნრნმ-ის წინამორბედი ჩართული hnRNA შეჯვარებაში მცირე ციტოპლაზმური რნმ scRNA/ 7macallozed რნმ-ის ხელახალი ნიშანი რნმ. ანტიმგრძნობიარე რნმ anRNA/micRNA არეგულირებს გენის ექსპრესიას რიბოზიმის რნმ ფერმენტულად აქტიური რნმ
2. რა არის მთავარი განსხვავება პროკარიოტულ და ევკარიოტურ პრომოტორებს შორის?
პროკარიოტული TTGACA --- TATAAT------საწყისი ადგილი-35 -10 ევკარიოტული გამაძლიერებელი---GC ---CAAT----TATAA-5mGpp-დაწყების ადგილი-110 -70 -25
3. რა არის ბუნებრივი პლაზმიდების ხელოვნური აგების ძირითადი ასპექტები?
ბუნებრივ პლაზმიდებს ხშირად აქვთ დეფექტები, ამიტომ ისინი არ არიან შესაფერისი გენეტიკური ინჟინერიის მატარებლებად გამოსაყენებლად და უნდა მოდიფიცირდნენ და აშენდეს: ა.დაამატეთ შესაბამისი სელექციური მარკერის გენი, როგორიცაა ორი ან მეტი, რომლებიც ადვილად გამოსაყენებელია შერჩევისთვის, ჩვეულებრივ, ანტიბიოტიკების გენი.ბ.გაზარდეთ ან შეამცირეთ ფერმენტის ჭრის შესაფერისი ადგილები რეკომბინაციის გასაადვილებლად.გ.შეამცირეთ სიგრძე, ამოიღეთ არასაჭირო ფრაგმენტები, გააუმჯობესეთ იმპორტის ეფექტურობა და გაზარდეთ დატვირთვის მოცულობა.დ.შეცვალეთ რეპლიკონი, მჭიდროდან ფხვიერამდე, ნაკლები ასლიდან მეტ ასლამდე.ე.დაამატეთ სპეციალური გენეტიკური ელემენტები გენეტიკური ინჟინერიის სპეციალური მოთხოვნების შესაბამისად
4. მოიყვანეთ ქსოვილის სპეციფიკური cDNA-ს დიფერენციალური სკრინინგის მეთოდის მაგალითი?
მზადდება ორი უჯრედის პოპულაცია, სამიზნე გენი გამოხატულია ან ძლიერად არის გამოხატული ერთ უჯრედში, ხოლო სამიზნე გენი არ არის გამოხატული ან სუსტად გამოხატულია მეორე უჯრედში, შემდეგ კი სამიზნე გენი აღმოჩენილია ჰიბრიდიზაციისა და შედარების გზით.მაგალითად, სიმსივნეების წარმოქმნისა და განვითარების დროს, სიმსივნური უჯრედები წარმოადგენენ mRNA-ს გამოხატვის განსხვავებული დონეებით, ვიდრე ნორმალური უჯრედები.აქედან გამომდინარე, სიმსივნესთან დაკავშირებული გენების სკრინინგი შესაძლებელია დიფერენციალური ჰიბრიდიზაციით.ინდუქციური მეთოდი ასევე შეიძლება გამოყენებულ იქნას იმ გენების გამოსაკვლევად, რომელთა ექსპრესიაც გამოწვეულია.
5. ჰიბრიდომის უჯრედული ხაზების გენერაცია და სკრინინგი?
ელენთის B უჯრედები + მიელომას უჯრედები, დაამატეთ პოლიეთილენ გლიკოლი (PEG) უჯრედების შერწყმას, და ელენთის B-მიელომას შერწყმის უჯრედები, რომლებიც გაიზარდა HAT გარემოში (შეიცავს ჰიპოქსანტინს, ამინოპტერინს, T) აგრძელებს კვების გაფართოებას.უჯრედის შერწყმა შეიცავს: ელენთა-ელენთა შერწყმის უჯრედებს: ვერ იზრდებიან, ელენთის უჯრედები არ შეიძლება კულტივირებული in vitro.ძვალ-ძვლის შერწყმის უჯრედები: არ შეუძლიათ ჰიპოქსანტინის გამოყენება, მაგრამ შეუძლიათ პურინის სინთეზირება მეორე გზით ფოლატის რედუქტაზას გამოყენებით.ამინოპტერინი თრგუნავს ფოლიუმის რედუქტაზას და, შესაბამისად, ვერ იზრდება.ძვლის ელენთა შერწყმის უჯრედები: შეიძლება გაიზარდოს HAT-ში, ელენთის უჯრედებს შეუძლიათ გამოიყენონ ჰიპოქსანტინი, ხოლო ძვლის უჯრედები უზრუნველყოფენ უჯრედების გაყოფის ფუნქციას.
6. როგორია დნმ-ის პირველადი სტრუქტურის განსაზღვრის პრინციპი და მეთოდი დიდეოქსი ტერმინალური ტერმინაციის მეთოდით (სანგერის მეთოდი)?
პრინციპი არის ნუკლეოტიდური ჯაჭვის ტერმინატორის-2,,3,-დიდეოქსინუკლეოტიდის გამოყენება დნმ-ის გაფართოების შესაწყვეტად.ვინაიდან მას აკლია 3-OH, რომელიც საჭიროა 3/5/ფოსფოდიესტერული ობლიგაციების ფორმირებისთვის, დნმ-ის ჯაჭვში ჩართვის შემდეგ, დნმ-ის ჯაჭვი აღარ შეიძლება გაგრძელდეს.ბაზის დაწყვილების პრინციპის მიხედვით, როდესაც დნმ პოლიმერაზას სჭირდება dNMP ნორმალურად გაფართოებულ დნმ-ის ჯაჭვში მონაწილეობისთვის, არსებობს ორი შესაძლებლობა, ერთი არის მონაწილეობა ddNTP-ში, რაც იწვევს დეოქსინუკლეოტიდური ჯაჭვის გაფართოების შეწყვეტას;მეორე არის მონაწილეობა dNTP-ში, რათა დნმ-ის ჯაჭვი კვლავ გააგრძელოს გაფართოვება მომდევნო ddNTP-ის ჩართვამდე.ამ მეთოდის მიხედვით შეიძლება მივიღოთ დნტპ-ით დამთავრებული სხვადასხვა სიგრძის დნმ-ის ფრაგმენტების ჯგუფი.მეთოდი იყოფა ოთხ ჯგუფად, შესაბამისად ddAMP, ddGMP, ddCMP და ddTMP.რეაქციის შემდეგ, პოლიაკრილამიდის გელის ელექტროფორეზს შეუძლია წაიკითხოს დნმ-ის თანმიმდევრობა საცურაო ზოლების მიხედვით.
7. როგორია აქტივატორი ცილის (CAP) დადებითი რეგულირების ეფექტი ტრანსკრიპციაზე?
ციკლური ადენილატის (cAMP) რეცეპტორის ცილა CRP (cAMP რეცეპტორული ცილა), cAMP-ისა და CRP-ის კომბინაციით წარმოქმნილ კომპლექსს CAP (cAMPactivated protein) ეწოდება.როდესაც E. coli იზრდება გარემოში, რომელსაც აკლია გლუკოზა, CAP-ის სინთეზი იზრდება და CAP-ს აქვს ისეთი პრომოტორების გააქტიურების ფუნქცია, როგორიცაა ლაქტოზა (Lac).ზოგიერთ CRP-დამოკიდებულ პრომოტორს არ გააჩნია ტიპიური -35 რეგიონის თანმიმდევრობის მახასიათებელი (TTGACA), რომელიც აქვთ ჩვეულებრივ პრომოტორებს.ამიტომ რნმ პოლიმერაზას მასთან შეერთება უჭირს.CAP-ის (ფუნქციის) არსებობა: შეუძლია მნიშვნელოვნად გააუმჯობესოს ფერმენტისა და პრომოტორის შემაკავშირებელ მუდმივობა.ის ძირითადად აჩვენებს შემდეგ ორ ასპექტს: ① CAP ეხმარება ფერმენტის მოლეკულას სწორად ორიენტირებაში პრომოტორის კონფორმაციის შეცვლით და ფერმენტთან ურთიერთქმედებით, რათა გაერთიანდეს -10 რეგიონთან და შეასრულოს -35 რეგიონის ფუნქციის ჩანაცვლების როლი.②CAP ასევე შეუძლია დათრგუნოს რნმ პოლიმერაზას შეკავშირება დნმ-ის სხვა უბნებთან, რითაც გაზრდის მის სპეციფიკურ პრომოტორთან შეკავშირების ალბათობას.
8. რა საფეხურები შედის ჩვეულებრივ დნმ-ის რეკომბინაციის ექსპერიმენტში?
ა.ამოიღეთ დონორი ორგანიზმის სამიზნე გენი (ან ეგზოგენური გენი) და ფერმენტულად დააკავშირეთ იგი სხვა დნმ-ის მოლეკულასთან (კლონირების ვექტორთან) ახალი რეკომბინანტული დნმ-ის მოლეკულის შესაქმნელად.ბ.გადაიტანეთ რეკომბინანტული დნმ-ის მოლეკულა მიმღებ უჯრედში და გაიმეორეთ და შეინახეთ იგი მიმღებ უჯრედში.ამ პროცესს ტრანსფორმაცია ეწოდება.გ.შეამოწმეთ და დაადგინეთ ის მიმღები უჯრედები, რომლებმაც შთანთქა რეკომბინანტული დნმ.დ.რეკომბინანტული დნმ-ის შემცველი უჯრედების მასობრივი კულტურა, რათა დადგინდეს, არის თუ არა უცხო დამხმარე გენი გამოხატული.
9. გენების ბიბლიოთეკის აგება მოცემულია რეკომბინანტების სკრინინგის სამი მეთოდი და მოკლედ აღწერილია პროცესი.
ანტიბიოტიკორეზისტენტობის სკრინინგი, რეზისტენტობის ჩასმა ინაქტივაცია, ცისფერ-თეთრი ლაქების სკრინინგი ან PCR სკრინინგი, დიფერენციალური სკრინინგი, დნმ-ის გამოკვლევა კლონირების ვექტორების უმეტესობა ატარებს ანტიბიოტიკების რეზისტენტობის გენებს (ანტიამპიცილინი, ტეტრაციკლინი).როდესაც პლაზმიდი გადადის Escherichia coli-ში, ბაქტერიები შეიძენენ წინააღმდეგობას, ხოლო გადატანის გარეშე არ ექნებათ წინააღმდეგობა.მაგრამ ვერ გაარჩევს, რეორგანიზაცია მოხდა თუ არა.ვექტორში, რომელიც შეიცავს ორ რეზისტენტულ გენს, თუ უცხო დნმ-ის ფრაგმენტი ჩასმულია ერთ-ერთ გენში და იწვევს გენის ინაქტივაციას, ორი ფირფიტის კონტროლი, რომლებიც შეიცავს სხვადასხვა პრეპარატს, შეიძლება გამოყენებულ იქნას დადებითი რეკომბინანტების სკრინინგისთვის.მაგალითად, pUC პლაზმიდი შეიცავს LacZ გენს (ბ-გალაქტოზიდაზას კოდირებით), რომელსაც შეუძლია დაშალოს ქრომოგენული სუბსტრატი X-gal (5-ბრომო-4-ქლორო-3-ინდოლ-β-D-გალაქტოზიდი) და გამოიმუშაოს ლურჯი, რითაც შტამი ლურჯად აქციოს.როდესაც უცხო დნმ არის ჩასმული, LacZ გენი არ შეიძლება გამოხატული იყოს და შტამი თეთრია, რათა მოხდეს რეკომბინანტული ბაქტერიების სკრინინგი.
10. ახსენით ტრანსგენური ცხოველების ემბრიონის ღეროვანი უჯრედების მეშვეობით მიღების ძირითადი პროცესი?
ემბრიონის ღეროვანი უჯრედები (ES) არის ემბრიონის უჯრედები ემბრიონის განვითარების დროს, რომლებიც შეიძლება ხელოვნურად იყოს კულტივირებული და პროლიფერირებული და აქვთ სხვა ტიპის უჯრედებად დიფერენცირების ფუნქცია.ES უჯრედების კულტურა: ბლასტოციტის შიდა უჯრედის მასა იზოლირებულია და კულტივირებული.როდესაც ES კულტივირებულია მიმწოდებლისგან თავისუფალ ფენაში, ის დიფერენცირებულია სხვადასხვა ფუნქციურ უჯრედებად, როგორიცაა კუნთოვანი უჯრედები და N უჯრედები.ფიბრობლასტების შემცველ გარემოში კულტივირებისას ES შეინარჩუნებს დიფერენციაციის ფუნქციას.ES შეიძლება იყოს გენეტიკურად მანიპულირებული და მისი დიფერენციაციის ფუნქცია შეიძლება იყოს ინტეგრირებული მისი დიფერენციაციის ფუნქციაზე გავლენის გარეშე, რაც წყვეტს შემთხვევითი ინტეგრაციის პრობლემას.შეიყვანეთ ეგზოგენური გენები ემბრიონის ღეროვან უჯრედებში, შემდეგ ჩანერგეთ ორსული მდედრი თაგვების საშვილოსნოში, გადაიზარდეთ ლეკვებად და გადაკვეთეთ ჰომოზიგოტური თაგვების მისაღებად.
