პირდაპირი PCR არის რეაქცია, რომელიც უშუალოდ იყენებს ცხოველურ ან მცენარეულ ქსოვილებს ამპლიფიკაციისთვის ნუკლეინის მჟავას ექსტრაქციის გარეშე.მრავალი თვალსაზრისით, პირდაპირი PCR მუშაობს როგორც ჩვეულებრივი PCR

მთავარი განსხვავება არის მორგებული ბუფერი, რომელიც გამოიყენება პირდაპირი PCR-ში, ნიმუში შეიძლება პირდაპირ დაექვემდებაროს PCR რეაქციას ნუკლეინის მჟავას ექსტრაქციის გარეშე, მაგრამ არსებობს შესაბამისი მოთხოვნები ფერმენტების ტოლერანტობისა და პირდაპირი PCR რეაქციაში ჩართული ბუფერის თავსებადობაზე.

მიუხედავად იმისა, რომ ჩვეულებრივ ნიმუშებში არის მეტ-ნაკლებად PCR ინჰიბიტორები, პირდაპირი PCR მაინც შეუძლია მიაღწიოს საიმედო გაძლიერებას ფერმენტების და ბუფერების მოქმედებით.ტრადიციული PCR რეაქცია მოითხოვს მაღალი ხარისხის ნუკლეინის მჟავას შაბლონად, რომელსაც შეუძლია შეაფერხოს PCR რეაქციის გლუვი პროგრესი, თუ შაბლონი შეიცავს ცილებს და სხვა მინარევებს.პირდაპირი PCR ამჟამად ერთ-ერთი ყველაზე პოპულარული ტექნოლოგიაა მოლეკულური დიაგნოსტიკის სფეროში.

01 პირდაპირი PCR თავდაპირველად გამოიყენებოდა ცხოველებისა და მცენარეებისთვის

პირდაპირი PCR-ის ყველაზე ადრეული გამოყენება არის ცხოველებისა და მცენარეების სფეროში, როგორიცაა ვირთხის, კატის, ქათმის, კურდღლის, ცხვრის, პირუტყვის და ა.შ., მცენარის ფოთლებისა და თესლების და ა.შ. სისხლი, ქსოვილი და თმა, რომლებიც გამოიყენება გენოტიპის შესასწავლად, ტრანსგენური, პლაზმიდების გამოვლენის, გენის ამოცნობის ანალიზი, დნმ-ის წყაროს იდენტიფიკაცია და სხვა ველის იდენტიფიკაცია.

ამ ველებს აქვთ საერთო მახასიათებლები, ანუ სამიზნე გენის შემცველობა შედარებით მაღალია და ნუკლეინის მჟავის ექსტრაქცია პრობლემურია, ამიტომ პირდაპირი PCR არა მხოლოდ დაზოგავს დროს და მცირე გავლენას ახდენს შედეგებზე, არამედ დაზოგავს ხარჯებს.

პირდაპირი PCR, რომელიც გამოიყენება პათოგენის გამოვლენისთვის, ბოლო წლების საკითხია, PCR რეაგენტების ზოგიერთმა მწარმოებელმა დიდი ძალისხმევა გაიღო ამ მიმართულებით ინოვაციების განხორციელებისას.განსაკუთრებით ამ COVID-19 ეპიდემიის დროს, ბაზარზე გამოჩნდა მრავალი ისეთი გამოვლენის პროდუქტი, როგორიცაა SARS-CoV-2 ნუკლეინის მჟავის გამოვლენის ნაკრები (Multiplex PCR ფლუორესცენტური გამოკვლევის მეთოდი) გამოკვლეული და შემუშავებული Foregene-ის მიერ, რომელიც იყენებს Real-time RT PCR ტექნოლოგიას (rRT-PCR) SARS-CoV-2 ნაცოფის მჟავას ხარისხობრივი ან ხარისხობრივი გამოვლენისთვის. ნაცხის ნიმუშები.

Foregene არის ერთ-ერთი კომპანია, რომელიც იყენებს Direct PCR ტექნოლოგიას, ნორმალური ORF1ab, N, E დავარიანტი აკავშირებს ნუკლეინის მჟავებს ადამიანის ცხვირ-ხახის ან ოროფარინგეალური ნაცხის ნიმუშებში, როგორიცაა SARS-CoV-2 B.1.1.7 ხაზი (დიდი ბრიტანეთი), B.1.351 ხაზი (ZA), B.1.617 ხაზი (IND) და P.1 ხაზი (BR).

02  პირდაპირი PCR-სთვის საჭირო რეაგენტები

ლიზატის ნიმუში

ნიმუში ლიზატის კონფიგურაცია შესაძლებელია თქვენ მიერ ან შეძენილი.სხვადასხვა ბრენდის ლიზატის შემადგენლობაში განსხვავება განასხვავებს ლიზინგის უნარს და შემდეგ ლიზის დრო ოდნავ განსხვავებული იქნება.მაგალითად, ცხოველური ქსოვილის ნიმუშების მოსამზადებლად, ზოგადად რეკომენდირებულია 30 წუთიანი ლიზიზი ან ღამისთევა, ხოლო ვირუსების ლიზისის ხსნარი მერყეობს 3-10 წუთის განმავლობაში.

PCR მასტერ ნაზავი

რეკომენდებულია ცხელი დაწყების დნმ პოლიმერაზას გამოყენება სპეციფიური ამპლიფიკაციის გასაძლიერებლად და ამპლიფიკაციის უნარის გასაზრდელად.პირდაპირი PCR-ის ბირთვი არის უაღრესად ტოლერანტული პოლიმერაზა.

აღმოფხვრა ან დათრგუნა კომპონენტები ნიმუშში, რომლებიც გავლენას ახდენენ დნმ-ის გაძლიერებაზე

ნიმუშის ლიზატით დამუშავების შემდეგ, ცილები, ლიპიდები და უჯრედის სხვა ნარჩენები გამოიყოფა, ეს ნივთიერებები თრგუნავს PCR რეაქციას.ამიტომ პირდაპირი PCR მოითხოვს შესაბამისი მოცილების ან ინჰიბიტორების დამატებას ამ ფაქტორების გავლენის შესამცირებლად.

03  პირდაპირი PCR-ის ცოდნის ხუთი წერტილის კოლექცია

პირველი, პირდაპირი PCR ტექნოლოგია არის პირდაპირი PCR ტექნოლოგია სხვადასხვა ბიოლოგიური ნიმუშებისთვის.ამ ტექნიკურ პირობებში, არ არის საჭირო ნუკლეინის მჟავის გამოყოფა და ამოღება, უშუალოდ ქსოვილის ნიმუშის ობიექტად გამოყენება და სამიზნე გენის პრაიმერების დამატება PCR რეაქციის შესასრულებლად.

მეორე, პირდაპირი PCR ტექნოლოგია არ არის მხოლოდ დნმ-ის შაბლონის გაძლიერების ტრადიციული ტექნოლოგია, არამედ მოიცავს რნმ შაბლონის საპირისპირო ტრანსკრიფციის PCR-ს.

მესამე, პირდაპირი PCR ტექნოლოგია არა მხოლოდ პირდაპირ ახორციელებს რუტინულ თვისებრივ PCR რეაქციებს ქსოვილის ნიმუშებზე, არამედ მოიცავს რეალურ დროში qPCR რეაქციებს, რაც მოითხოვს რეაქციის სისტემას ჰქონდეს ძლიერი ანტი-ფონური ფლუორესცენციის ჩარევის შესაძლებლობა და ენდოგენური ფლუორესცენცია აფერხებს ანტაგონისტურ უნარს.

მეოთხე, პირდაპირი PCR ტექნოლოგიით მიზანმიმართულ ნიმუშებს მხოლოდ ნუკლეინის მჟავას შაბლონების გამოყოფა სჭირდებათ და არ ამოიღებენ ცილებს, პოლისაქარიდებს, მარილის იონებს და ა.შ., რომლებიც ხელს უშლიან PCR რეაქციას.რაც მოითხოვს ნუკლეინის მჟავას პოლიმერაზას და PCR Mix-ს რეაქციის სისტემაში, რომ ჰქონდეს შესანიშნავი წინააღმდეგობა და ადაპტირება, რათა უზრუნველყოს ფერმენტის აქტივობა და რეპლიკაციის სიზუსტე რთულ პირობებში.

მეხუთე, პირდაპირი PCR ტექნოლოგიით გამიზნული ქსოვილის ნიმუში ყოველგვარი ნუკლეინის მჟავას გამდიდრების მკურნალობის გარეშე და შაბლონის რაოდენობა ძალიან მცირეა, რაც მოითხოვს რეაქციის სისტემას ჰქონდეს უკიდურესად მაღალი მგრძნობელობა და გამაძლიერებელი ეფექტურობა.