ხშირად დასმული კითხვები ამისთვისცხოველის მთლიანი რნმ-ის იზოლაციის ნაკრები

ქვემოთ მოცემულია იმ პრობლემების ანალიზი, რომლებიც შეიძლება შეგხვდეთცხოველური ქსოვილის/უჯრედის რნმ-ის ექსტრაქცია will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

რნმ არ არის ამოღებული ან რნმ-ის გამოსავლიანობა დაბალია

ხშირად არსებობს სხვადასხვა ფაქტორები, რომლებიც გავლენას ახდენენ აღდგენის ეფექტურობაზე, როგორიცაა: ქსოვილის ნიმუშის რნმ-ის შემცველობა, მოქმედების მეთოდი, ელუციის მოცულობა და ა.შ.

1. ოპერაციის დროს ჩატარდა ყინულის აბაზანა ან კრიოგენული (4 °C) ცენტრიფუგაცია.

რეკომენდაცია: იმუშავეთ ოთახის ტემპერატურაზე (15-25°C) მთელი პროცესის განმავლობაში, არ გააკეთოთ ყინულის აბაზანა და ცენტრიფუგა დაბალ ტემპერატურაზე.

2. ნიმუშის არასწორი შენახვა ან ნიმუშის შენახვის გადაჭარბებული დრო.

რეკომენდაცია: შეინახეთ ნიმუშები -80 °C ტემპერატურაზე ან გაყინეთ თხევად აზოტში და მოერიდეთ გაყინვა-დათბობის განმეორებით გამოყენებას;შეეცადეთ გამოიყენოთ ახალი ქსოვილი ან კულტივირებული უჯრედები რნმ-ის ექსტრაქციისთვის.

3. ნიმუშის არასაკმარისი ლიზისი.

რეკომენდაცია: ქსოვილის ჰომოგენიზაციისას, დარწმუნდით, რომ ქსოვილი საკმარისად ჰომოგენიზებულია და ქსოვილის უჯრედები საკმარისად იყოფა რნმ-ის გამოყოფის ასახსნელად.

4. ელუენტი არასწორად არის დამატებული.

რეკომენდაცია: დაადასტურეთ, რომ RNase-ის გარეშე ddH₂O ემატება წვეთობრივად გამწმენდი სვეტის მემბრანის შუაში.

5. აბსოლუტური ეთანოლის სწორი მოცულობა არ დაემატა ბუფერ RL2-ს ან ბუფერს RW2-ს.

რეკომენდაცია: მიჰყევით ინსტრუქციას, დაამატეთ აბსოლუტური ეთანოლის სწორი მოცულობა Buffer RL2 და Buffer RW2 და კარგად აურიეთ ნაკრების გამოყენებამდე.

6. ქსოვილის ნიმუშის დოზა არ არის შესაბამისი.

რეკომენდაცია: გამოიყენეთ 10-20 მგ ქსოვილი ან (1-5) × 10⁶უჯრედები 500 μl ბუფერულ RL1-ზე, რადგან ქსოვილის გადაჭარბებულმა გამოყენებამ შეიძლება გამოიწვიოს რნმ-ის ექსტრაქციის შემცირება.

7. გამორეცხვის არასწორი მოცულობა ან არასრული ელუცია.

რეკომენდაცია: გამწმენდი სვეტის გამორეცხვის მოცულობა არის 50-200 μl;თუ გამორეცხვის ეფექტი არ არის დამაკმაყოფილებელი, რეკომენდებულია ოთახის ტემპერატურის განლაგების დროის გახანგრძლივება წინასწარ გახურებული RNase-ის გარეშე ddH-ის დამატების შემდეგ.₂O, მაგ. 5-10 წთ.

8. გამწმენდ სვეტს აქვს ეთანოლის ნარჩენი ბუფერული RW2 გარეცხვის შემდეგ.

რეკომენდაცია: თუ ბუფერული RW2 რეცხვის შემდეგ არის ეთანოლის ნარჩენები, ცარიელ მილში ცენტრიფუგირება 1 წთ, ცარიელი მილის ცენტრიფუგაციის დრო შეიძლება გაიზარდოს 2 წთ-მდე, ან გამწმენდი სვეტი შეიძლება განთავსდეს ოთახის ტემპერატურაზე 5 წუთის განმავლობაში, რათა ადეკვატურად მოიხსნას ნარჩენი ეთანოლი.

გასუფთავებული რნმ იშლება

გასუფთავებული რნმ-ის ხარისხი დაკავშირებულია ისეთ ფაქტორებთან, როგორიცაა ნიმუშის შენარჩუნება, RNase დაბინძურება და მანიპულირება და ა.შ.

1. ქსოვილის ნიმუშები დროულად არ ინახება.

რეკომენდაცია: თუ ქსოვილის ნიმუშები ან უჯრედები არ იქნა გამოყენებული დროულად შეგროვების შემდეგ, დაუყოვნებლივ შეინახეთ კრიოკონსერვაცია -80 °C-ზე ან თხევადი აზოტით.რნმ-ის ამოსაღებად, შეძლებისდაგვარად გამოიყენეთ ახლად აღებული ქსოვილის ან უჯრედის ნიმუში.

2. ქსოვილის ნიმუშების განმეორებითი გაყინვა-დათბობა.

რეკომენდაცია: ქსოვილის ნიმუშების შენახვისას უმჯობესია დაჭრათ ისინი მცირე ნაჭრებად შესანარჩუნებლად და ამოიღოთ ერთი ნაწილი მათი გამოყენებისას, რათა თავიდან აიცილოთ ნიმუშის განმეორებითი გაყინვა-დათბობა და რნმ-ის დეგრადაცია.

3. RNase შეყვანილია ან არ ატარებს ერთჯერადი ხელთათმანებს, ნიღბებს და ა.შ.

რეკომენდაცია: რნმ-ის ექსტრაქციის ექსპერიმენტები საუკეთესოდ ჩატარდება რნმ-ის მანიპულაციის ცალკეულ ოთახებში და ცხრილი გასუფთავდება ექსპერიმენტამდე.

ატარეთ ერთჯერადი ხელთათმანები და ნიღბები ექსპერიმენტის დროს, რათა მინიმუმამდე დაიყვანოთ რნმ-ის დეგრადაცია, რომელიც გამოწვეულია RNase-ს შეყვანით.

4. გამოყენებისას რეაგენტები დაბინძურებულია RNase-ით.

რეკომენდაცია: ჩაანაცვლეთ ახალი ცხოველის ტოტალური რნმ-ის იზოლაციის ნაკრებით შესაბამისი ექსპერიმენტებისთვის.

5. რნმ-ით მანიპულირებაში გამოყენებული ცენტრიფუგის მილები, წვერები და ა.შ. დაბინძურებულია RNase-ით.

რეკომენდაცია: დაადასტურეთ, რომ ცენტრიფუგის მილები, წვერები, პიპეტები და ა.შ., რომლებიც გამოიყენება რნმ-ის ექსტრაქციაში, არ შეიცავს RNase-ს.

გაწმენდილი მიღებული რნმ გავლენას ახდენს ქვედა დინების ექსპერიმენტებზე

გამწმენდი სვეტით გაწმენდილი რნმ, თუ მარილის იონები, ცილის შემცველობა ძალიან დიდია, გავლენას მოახდენს ქვედა დინების ექსპერიმენტზე, როგორიცაა: საპირისპირო ტრანსკრიფცია, ჩრდილო ბლოტი და სხვ.

1. გამოყოფილ რნმ-ს აქვს მარილის იონის ნარჩენები.

რეკომენდაცია: დაადასტურეთ, რომ ეთანოლის სწორი მოცულობა დაემატა Buffer RW2-ს და შეასრულეთ 2 გამწმენდი სვეტის რეცხვა სამუშაოსთვის მითითებული ცენტრიდანული სიჩქარით;თუ არსებობს მარილის იონის ნარჩენები, დატოვეთ გამწმენდი სვეტი ბუფერულ RW2-ში 5 წუთის განმავლობაში ოთახის ტემპერატურაზე და განახორციელეთ ცენტრიფუგაცია მარილით დაბინძურების მაქსიმალურად მოსაშორებლად.

2. ეთანოლის ნარჩენი გამოყოფილ რნმ-ში.

რეკომენდაცია: დაადასტურეთ, რომ ბუფერული RW2 რეცხვის შემდეგ, შეასრულეთ ცარიელი მილის ცენტრიფუგაციის ოპერაცია ოპერაციისთვის მითითებულ ცენტრიფუგაციის სიჩქარით, გაზარდეთ ცარიელი მილის ცენტრიფუგაციის დრო 2 წთ-მდე, თუ ჯერ კიდევ არის ეთანოლის ნარჩენი, ან დატოვეთ იგი ოთახის ტემპერატურაზე 5 წუთის განმავლობაში ცარიელი მილის ცენტრიფუგაციის შემდეგ, რათა მაქსიმალურად გაიზარდოს.

ნულცეინის მჟავას ნიმუშების ტიპების იზოლაცია

Foregene-ის რნმ-ის იზოლაციის კომპლექტებს შეუძლიათ მიიღონ მთლიანი რნმ-ის იზოლაცია/ექსტრაქცია შემდეგი ნიმუშის წყაროებიდან: ცხოველური ქსოვილი, მცენარე, უჯრედები, ვირუსები, სისხლი და ა.შ.

როგორ შევინახო ნაკრები

ინახება ოთახის ტემპერატურაზე 24 თვის განმავლობაში.