• ფეისბუქი
  • linkedin
  • youtube

ტყვია

გრძელი არაკოდიციური რნმ, lncRNA არის არაკოდიციური რნმ, რომლის სიგრძე 200 ნუკლეოტიდზე მეტია, ზოგადად 200-100000 ნტ-ს შორის.lncRNA არეგულირებს გენის ექსპრესიას ეპიგენეტიკურ, ტრანსკრიფციულ და პოსტტრანსკრიპციულ დონეზე და მონაწილეობს X ქრომოსომის გაჩუმებაში, გენომის ანაბეჭდსა და ქრომატინის მოდიფიკაციაში, ტრანსკრიპციის აქტივაციაში, ტრანსკრიპციის ჩარევაში, ბირთვულ ტრანსპორტში, უჯრედის ციკლის რეგულირებაში, უჯრედის დიფერენციაციის რეგულირებაში და დოზის კომპენსაციის სხვა მნიშვნელოვანი ეფექტებია. და ადამიანთა დაავადებების პროფილაქტიკა და ამჟამად წარმოადგენს ერთ-ერთ ცხელ წერტილს ბიომედიცინის სფეროში.

01  LncRNA-ს ტიპები და მახასიათებლები

news723 (1)

lncRNA იყოფა მრავალ ტიპად მისი ფორმირების სხვადასხვა წყაროების მიხედვით, როგორც ეს ნაჩვენებია ზემოთ მოცემულ ფიგურაში.აქვს შემდეგი მახასიათებლები:

1. lncRNA-ები, როგორც წესი, უფრო გრძელია, დინამიური ექსპრესიითა და დიფერენცირების დროს შეჯვარების სხვადასხვა მეთოდით
2. კოდირებულ გენებთან შედარებით, lncRNA ჩვეულებრივ აქვს უფრო დაბალი გამოხატვის დონე
3. lncRNA-ს უმეტესობას აქვს აშკარა დროითი და სივრცითი ექსპრესიის სპეციფიკა ქსოვილის დიფერენციაციისა და განვითარების პროცესში.
4. დამახასიათებელი გამონათქვამებია სიმსივნეებსა და სხვა დაავადებებში
5. lncRNA-ს უჯრედქვეშა მდებარეობები მრავალფეროვანია
6. თანმიმდევრობა დაბალია კონსერვაციაში, მაგრამ ფუნქციას აქვს კონსერვაციის გარკვეული ხარისხი და ა.შ.

02 ხშირად დასმული კითხვები LncRNA საპირისპირო ტრანსკრიფციის შესახებ

უჯრედებში lncRNA-ს დაბალი შემცველობის, გრძელი სიგრძისა და მაღალი დონის სტრუქტურის გამო, ასეთ რნმ-ს ხშირად აქვს რთული სტრუქტურები, როგორიცაა ღეროს მარყუჟები ან თმის სამაგრები, და RT-qPCR მიდრეკილია წარუმატებელი საპირისპირო ტრანსკრიფციის ან დაბალი ეფექტურობის პრობლემებისკენ.

03 LncRNA საპირისპირო ტრანსკრიფციის ხსნარი

news723 (2)

ცენტრალური წესით, რნმ ვირუსების პროცესს, რომლებიც იყენებენ საკუთარ საპირისპირო ტრანსკრიპტაზას დნმ-ის სინთეზირებისთვის რნმ-ის შაბლონის გამოყენებით, ეწოდება საპირისპირო ტრანსკრიფცია.რნმ ვირუსის საპირისპირო ტრანსკრიპტაზას გამოყენების პროცესს cDNA შაბლონის სინთეზირებისთვის in vitro ეწოდება საპირისპირო ტრანსკრიფცია.საპირისპირო ტრანსკრიპციის სისტემაში შემავალი ძირითადი ელემენტები: რნმ-ის შაბლონი, საპირისპირო ტრანსკრიპტაზა, პრაიმერები და სხვა კომპონენტები.

1.რნმ-ის შაბლონი

რნმ-ის შაბლონის გავლენა საპირისპირო ტრანსკრიფციაზე აისახება მის სტრუქტურაში, სიწმინდესა და მთლიანობაში.რაც უფრო მაღალია მოპოვებული რნმ-ის სისუფთავე და მთლიანობა, მით უფრო მაღალია საპირისპირო ტრანსკრიფციის ეფექტურობა და მით უფრო ზუსტი იქნება შემდგომი რაოდენობრივი შედეგები.ხშირად გამოყენებული რნმ-ის ექსტრაქციის რეაგენტებით გაწმენდილი რნმ ხშირად შეიცავს ალკოჰოლისა და გუანიდინის მარილების ნარჩენებს, რომლებსაც აქვთ ძლიერი ინჰიბიტორული ეფექტი უკუტრანსკრიპტაზას უმეტესობაზე.

2.უკუ ტრანსკრიპტაზა

საპირისპირო ტრანსკრიპტაზას აქვს საკვანძო გავლენა მთელ საპირისპირო ტრანსკრიპციის სისტემაზე.უმეტეს ლაბორატორიებში გამოყენებული საპირისპირო ტრანსკრიპტაზასთვის შესაფერისი ტემპერატურაა 42°C.ფაქტობრივად, მაღალი დონის რნმ-ის სტრუქტურის გახსნა უფრო მაღალ ტემპერატურას მოითხოვს, ხოლო საპირისპირო ტრანსკრიპტაზას მოთხოვნები უფრო მაღალია.

3.პრაიმერი

საპირისპირო ტრანსკრიფციის პრაიმერები მოიცავს გენის სპეციფიკურ პრაიმერებს, შემთხვევით პრაიმერებს და Oligo dT პრაიმერებს.lncRNA-ების უმეტესობა არ შეიცავს polyA კუდებს და მნიშვნელოვანია შემთხვევითი პრაიმერების სწორად შეხამება Oligo dT-სთან.

4.სხვა კომპონენტები

იმის გათვალისწინებით, რომ რნმ განსაკუთრებით ადვილად იშლება, კომპონენტების შეყვანა საპირისპირო ტრანსკრიფციის სისტემაში შეიძლება მინიმუმამდე დაიყვანოს, რაც ეფექტურად აფერხებს RNase-ს შემოსვლას და უზრუნველყოს საპირისპირო ტრანსკრიფციის გლუვი პროგრესი.

Fორეგენიიღებს რნმ შაბლონიდან, საპირისპირო ტრანსკრიფცია qPCR-ზე

ყოვლისმომცველი თანხლებით თქვენი lncRNA გამოვლენა

news723 (3)

ცხოველის მთლიანი რნმ Iხსნანაკრები (gDNA მოცილების სვეტით)

news723 (4)

უჯრედის მთლიანი რნმ Iხსნანაკრები (gDNA მოცილების სვეტით)

news723 (5)

Lnc-RT HeroTM I (gDNase) (სუპერ პრემიქსი პირველი ჯაჭვის cDNA სინთეზისთვის lncRNA-დან)

news723 (6)

რეალურ დროში PCR EasyTM-SYBR Green I

Aუპირატესობები ofრნმ-ის ექსტრაქცია:

ნაკრები იყენებს მესამე თაობის რნმ-ის ექსტრაქციის ტექნოლოგიას, არ არის საჭირო DNase-ის გამოყენება.

11 წუთი 96, 24, 12 და 6 ჭაბურღილის ფირფიტის კულტივირებული უჯრედებიდან, გდნმ-ისგან თავისუფალი, მაღალი სისუფთავის, მაღალი ხარისხის მთლიანი უჯრედის რნმ-ის მაღალი ეფექტურობის ექსტრაქცია.

lncRNA საპირისპირო ტრანსკრიფციის უპირატესობები:

საპირისპირო ტრანსკრიფციის სისტემა სპეციალურად შემუშავებული LncRNA-სთვის გენომიური დნმ-ის დაბინძურების სწრაფად მოსაშორებლად.

საპირისპირო ტრანსკრიფციის სისტემას აქვს მაღალი თერმული სტაბილურობა და კვლავ აქვს კარგი საპირისპირო ტრანსკრიფციის შესრულება 50°C ტემპერატურაზე.

შაბლონები მაღალი GC შემცველობით და რთული მეორადი სტრუქტურით შეიძლება შეიცვალოს მაღალი ეფექტურობით.

უპირატესობებიof qPCR:

ცხელი დაწყება Foregene Taq პოლიმერაზას აქვს უფრო მაღალი გამაძლიერებელი ეფექტურობა, უფრო მაღალი გაძლიერების მგრძნობელობა და უფრო მაღალი გამაძლიერებელი სპეციფიკა

ოპტიმიზებული Real PCR Easy Mix ხდის SYBR Green I-ს უფრო მაღალი გამოვლენის მგრძნობელობა და მისი ფლუორესცენციის ინტენსივობა 3-5-ჯერ აღემატება მსგავს პროდუქტებს, რაც შეიძლება დააკმაყოფილოს სხვადასხვა ტიპის ფლუორესცენციის რაოდენობრივი ექსპერიმენტების საჭიროებები.


გამოქვეყნების დრო: ივლის-23-2021