მცენარეთა ტოტალური რნმ-ის საიზოლაციო ნაკრები პლუს ტოტალური რნმ გამწმენდის ნაკრები პოლისაქარიდებითა და პოლიფენოლებით მდიდარი მცენარეებისთვის
ნაკრების აღწერა:
კატ.No.RE-05021/05022/05024
მთლიანი რნმ-ის გასაწმენდად მცენარეთა ზოგადი ნიმუშებიდან, რომლებიც შეიცავს მაღალი პოლისაქარიდის და პოლიფენოლის კომპონენტებს.
სწრაფად ამოიღეთ მაღალი ხარისხის მთლიანი რნმ მცენარის ნიმუშებიდან პოლისაქარიდების და პოლიფენოლების მაღალი შემცველობით.
RNase-ის გარეშე დნმ-ის გამწმენდი სვეტის გამოყენებით
მარტივი - ყველა ოპერაცია სრულდება ოთახის ტემპერატურაზე
სწრაფი - ოპერაცია შეიძლება დასრულდეს 30 წუთში
უსაფრთხო - არ გამოიყენება ორგანული რეაგენტი 
სპეციფიკაციები
50 მოსამზადებელი, 200 მოსამზადებელი
ნაკრები იყენებს Foregene-ის მიერ შემუშავებულ სპინის სვეტს და ფორმულას, რომელსაც შეუძლია ეფექტურად ამოიღოს მაღალი სისუფთავის და მაღალი ხარისხის მთლიანი რნმ მცენარეთა სხვადასხვა ქსოვილებიდან მაღალი პოლისაქარიდების ან პოლიფენოლების შემცველობით.ის უზრუნველყოფს დნმ-ის გამწმენდ სვეტს, რომელსაც შეუძლია ადვილად ამოიღოს გენომიური დნმ სუპერნატანტიდან და ქსოვილის ლიზატიდან.მხოლოდ რნმ-ის სვეტს შეუძლია ეფექტურად დააკავშიროს რნმ.კომპლექტს შეუძლია ერთდროულად დიდი რაოდენობით ნიმუშების დამუშავება.
მთელი სისტემა არ შეიცავს RNase-ს, ამიტომ გაწმენდილი რნმ არ დაიშლება.ბუფერს PRW1 და ბუფერს PRW2 შეუძლია უზრუნველყოს, რომ მიღებული რნმ არ იყოს დაბინძურებული ცილებით, დნმ-ით, იონებით და ორგანული ნაერთებით.
ნაკრების კომპონენტები
| ბუფერი PSL1, ბუფერი PS, ბუფერი PSL2 |
| ბუფერი PRW1, ბუფერი PRW2 |
| RNase-ის გარეშე ddH2O, დნმ-ის გამწმენდი სვეტი |
| რნმ-მხოლოდ სვეტი |
მახასიათებლები და უპირატესობები
■ მუშაობა ოთახის ტემპერატურაზე (15-25℃) მთელი პროცესის განმავლობაში, ყინულის აბაზანისა და დაბალი ტემპერატურის ცენტრიფუგაციის გარეშე.
■ სრული ნაკრები RNase-ის გარეშე, არ არის საჭირო რნმ-ის დეგრადაციის შესახებ ფიქრი.
■ განსაკუთრებით შესაფერისია რნმ-ის გასაწმენდად პოლისაქარიდებისა და პოლიფენოლების მცენარეული ნიმუშებიდან.
■ დნმ-ის გამწმენდი სვეტი სპეციალურად უკავშირდება დნმ-ს, რათა კომპლექტმა შეძლოს გენომიური დნმ-ის დაბინძურების მოცილება DNase-ის დამატების გარეშე.
■ რნმ-ის მაღალი გამოსავლიანობა: მხოლოდ რნმ-ის სვეტი და უნიკალური ფორმულა ეფექტურად წმენდს რნმ-ს.
■ სწრაფი სიჩქარე: მარტივი მუშაობა და შეიძლება დასრულდეს 30 წუთში.
■ უსაფრთხოება: არ არის საჭირო ორგანული რეაქტივი.
■ მაღალი ხარისხი: გაწმენდილი რნმ-ის ფრაგმენტები არის მაღალი სისუფთავის, პროტეინისა და სხვა მინარევებისაგან თავისუფალი და შეუძლია შეასრულოს სხვადასხვა ექსპერიმენტული გამოყენება.
პროდუქტის პარამეტრები
■ ქვემოთ მოყვანილი აპლიკაციები: პირველი ჯაჭვის cDNA სინთეზი, RT-PCR, მოლეკულური კლონირება, Northern Blot და ა.შ.
■ ნიმუში: პოლისაქარიდების და პოლიფენოლების ახალი ან გაყინული მცენარეული ქსოვილები
■ დოზა: 50მგ მცენარეული ქსოვილი
■ გამწმენდი სვეტის რნმ-ის შეკავშირების მაქსიმალური სიმძლავრე: 80 მკგ
■ გამორეცხვის მოცულობა: 50-200 მკლ
ნაკრების აპლიკაცია
იგი განკუთვნილია მთლიანი რნმ-ის მოპოვებისა და გასაწმენდად ახალი ან გაყინული მცენარის ქსოვილის ნიმუშებიდან (განსაკუთრებით მცენარის ახალი ფოთლის ქსოვილიდან) მაღალი პოლისაქარიდების და პოლიფენოლის შემცველობით.
სამუშაო ნაკადი
დიაგრამა
Plant Total RNA Isolation Kit Plus-მა დაამუშავა 50მგ პოლისაქარიდების და პოლიფენოლების ახალი ფოთლები და 5% გაწმენდილი რნმ გამოიცადა ელექტროფორეზით.
1: ბანანი
2: გინკო
3: ბამბა
4: ბროწეული
შენახვა და შენახვის ვადა
ამ ნაკრების შენახვა შესაძლებელია 24 თვის განმავლობაში მშრალ პირობებში ოთახის ტემპერატურაზე (15-25℃);თუ საჭიროა მისი შენახვა უფრო დიდი ხნის განმავლობაში, მისი შენახვა შესაძლებელია 2–8℃ ტემპერატურაზე.
ბუფერი PSL1 შეიძლება განთავსდეს 4℃ზე 1 თვის განმავლობაში β-მერკაპტოეთანოლის დამატების შემდეგ (რეკომენდებულია მისი დამატება ექსპერიმენტის დროს).
სვეტი ჩაკეტილია
სვეტის ჩაკეტვის შემდეგ რნმ-ის გამოსავლიანობა მცირდება ან შეუძლებელიც კი ხდება რნმ-ის გაწმენდა და მიღებული რნმ-ის მასა დაბალია.
საერთო მიზეზების ანალიზი:
1. ნიმუშის შესვენებები არ არის საფუძვლიანი.
ნიმუშის გატეხვა არ იწვევს მთლიანად დნმ-ის გაწმენდის სვეტის დაბლოკვას, ხოლო გავლენას ახდენს რნმ-ის გამოსავლიანობასა და ხარისხზე.ჩვენ გირჩევთ სწრაფ დაფქვას საკმარის თხევად აზოტში ნიმუშების გატეხვისას, შეეცადეთ გაანადგუროთ ნიმუშის უჯრედის კედელი, უჯრედის მემბრანა და სხვა ქსოვილი.პოლიოლის პოლისაქარიდების მცენარეული ნიმუშებისთვის, ჩვენ გირჩევთ გამოიყენოთ Plant Total RNA IOLATION KIT PLUS.
2. გამოყოფილი ნიმუშის ზენატანის შეწოვისას დნმ-ის გამწმენდი სვეტით, შესაძლებელია უჯრედის ფრაგმენტირებული ნალექის ჩასუნთქვა.
აღებული უჯრედის ფრაგმენტული ნალექები გამოიწვევს RNA-ONLY სვეტს, რომელიც დაიბლოკება რნმ-ის ადსორბციის ოპერაციის შესრულებისას (იხ. ნაბიჯი 6).ჩვენ გირჩევთ, ფრთხილად იყოთ ამ სუპერნატანტის შეწოვისას, რათა თავიდან აიცილოთ უჯრედის ნარჩენების შეწოვა.
3. ნიმუშის საწყისი რაოდენობა ძალიან ბევრია.
ნიმუშის გადაჭარბებული გამოყენება გამოიწვევს ნიმუშის არასრულ ფრაგმენტაციას ან უჯრედის არასრულ ლიზას ბუფერული PSL1-ით, რაც გამოიწვევს გამწმენდის სვეტის დაბლოკვას გაწმენდის დროს.მცენარეთა მთლიანი რნმ-ის იზოლაციის ნაკრები თითოეული გაწმენდილი საოპერაციო ნიმუში არის 50 მგ.პოლიოლის პოლისაქარიდების მცენარეული ნიმუშებისთვის, ჩვენ გირჩევთ, სცადოთ Plant Total RNA IOLATION KIT PLUS.
4. ცენტრიფუგის ტემპერატურა ძალიან დაბალია.
რნმ-ის იზოლაციისა და გაწმენდის მთელი პროცესი ტარდება ოთახის ტემპერატურაზე (20-25°გ), გარდა იმისა, რომ ნიმუში ქსოვილი გატეხილია თხევადი აზოტით. ზოგიერთი კრიოგენური ცენტრიფუგის ტემპერატურა 20-ზე დაბალია.℃, რამაც შეიძლება გამოიწვიოს დნმ-ის გამწმენდი სვეტის და/ან მხოლოდ რნმ-ის სვეტის ბლოკირება.თუ ეს მოხდება, დააყენეთ ცენტრიფუგის ტემპერატურა 20-25-ზე℃, დადარწმუნდით, რომ ლიზისური ნარევი და/ან ეთანოლით დამატებული ზენატანი წინასწარ გაცხელდა 37-მდე°C.
არ არის მოპოვებული რნმ ან რნმ-ის გამოსავალი დაბალია
როგორც წესი, არსებობს მრავალი ფაქტორი, რომელიც გავლენას ახდენს აღდგენის ეფექტურობაზე, როგორიცაა: ნიმუშის რნმ-ის შემცველობა, ოპერაციის მეთოდი, გამორეცხვის მოცულობა და ა.შ.
საერთო მიზეზების ანალიზი შემდეგნაირად:
1.ოპერაციის დროს ჩატარდა ყინულის აბაზანა ან დაბალი ტემპერატურის (4°C) ცენტრიფუგაცია.
შემოთავაზება: იმუშავეთ ოთახის ტემპერატურაზე (15-25°გ) მთელი პროცესის განმავლობაში არ გააკეთოთ ყინულის აბაზანა და დაბალი ტემპერატურის ცენტრიფუგაცია.
2. რნმ დეგრადირებულია ნიმუშის არასათანადო შენარჩუნების ან ნიმუშის გრძელვადიანი შენარჩუნების გამო.
რეკომენდაცია: ახლად შეგროვებული ნიმუშები სწრაფად უნდა გაიყინოს თხევად აზოტში და შემდეგ ინახებოდეს -80°C-ზე დიდი ხნის განმავლობაში, თავიდან აიცილოთ ნიმუშების განმეორებითი გაყინვა და გალღობა;ან დაუყოვნებლივ დაასველეთ ნიმუშები რნმ-ის სტაბილიზატორის RNA ხსნარში (ცხოველის ნიმუშები).
3. ნიმუშის არასაკმარისი ფრაგმენტაცია და ლიზისი იწვევს გამწმენდი სვეტის ბლოკირებას.
წინადადება: ქსოვილის დაფქვისას დარწმუნდით, რომ ქსოვილი საკმარისად არის დაფქული და სწრაფად გადაიტანეთ იგი წინასწარ მომზადებულ ბუფერ PSL1-ში (დაადასტურეთ, რომ დამატებულია β-ME-ს სწორი პროპორცია, იხილეთ პროცედურის ნაბიჯი 1).
4.ელუენტი დამატებულია არასწორად.
შემოთავაზება: დარწმუნდით, რომ RNase-ისგან თავისუფალი ddH2O ჩაედინება გამწმენდი სვეტის მემბრანის შუაში.
5. აბსოლუტური ეთანოლის სწორი მოცულობა არ დაემატა ბუფერ PSL2-ს ან ბუფერს PRW2-ს.
წინადადება: გთხოვთ, მიჰყევით ინსტრუქციას, დაამატეთ აბსოლუტური ეთანოლის სწორი მოცულობა ბუფერ PSL2-სა და Buffer PRW2-ში და კარგად აურიეთ ნაკრების გამოყენებამდე.
6. ქსოვილის ნიმუშის რაოდენობა შეუსაბამოა.
შემოთავაზება: გამოიყენეთ 50 მგ ქსოვილი 500 μl ბუფერ PSL1-ზე.ძალიან ბევრი ქსოვილის გამოყენება შეამცირებს მოპოვებული რნმ-ის რაოდენობას და შედეგად მიღებული რნმ-ის სისუფთავე ასევე შემცირდება.ჩვენ მკაცრად გირჩევთ, რომ ნიმუშის საწყისი დოზა არ უნდა აღემატებოდეს 50 მგ-ს რნმ-ის ექსტრაქციის ოპერაციაზე.
7. გამორეცხვის შეუსაბამო მოცულობა ან არასრული ელუცია.
შემოთავაზება: გამწმენდი სვეტის ელუენტის მოცულობა არის 50-200 μl;თუ გამორეცხვის ეფექტი არ არის დამაკმაყოფილებელი, რეკომენდებულია დროის გახანგრძლივება ოთახის ტემპერატურაზე წინასწარ გახურებული RNase-ის გარეშე ddH2O-ს დამატების შემდეგ, როგორიცაა 5-10 წუთი.
8. გამწმენდ სვეტს აქვს ეთანოლის ნარჩენი BufferPRW2-ით გარეცხვის შემდეგ.
წინადადება: თუ ცარიელი მილის ცენტრიფუგირება ხდება 1 წუთის განმავლობაში და ბუფერ PRW2-ში გარეცხვის შემდეგ ჯერ კიდევ რჩება ეთანოლი, შეგიძლიათ გაზარდოთ ცარიელი მილის ცენტრიფუგაციის დრო 2 წთ-მდე, ან განათავსოთ გამწმენდი სვეტი ოთახის ტემპერატურაზე 5 წუთის განმავლობაში, რათა სრულად მოიხსნას ნარჩენი ეთანოლი.
9. ნაკრები არასწორად იქნა გამოყენებული.
შემოთავაზება: პოლიფენოლური პოლისაქარიდების მცენარეული ნიმუშებისთვის, ჩვეულებრივი კომპლექტების გამოყენებით, როგორიცაა Plant Total RNA Isolation Kit, შეიძლება ვერ მივიღოთ იდეალური რნმ-ის ნიმუშები.ჩვენ გირჩევთ გამოიყენოთ Plant Total RNA IsolationKit Plus, რომელიც სპეციალურად შექმნილია პოლიფენოლური პოლისაქარიდის მცენარის ნიმუშებისთვის.სპეციალურად შემუშავებული ნაკრები პოლიფენოლისა და პოლისაქარიდის მცენარის ნიმუშებიდან რნმ-ის მოსაპოვებლად.
OD260/OD280 მნიშვნელობა დაბალია
რნმ-ის გამორეცხვა ddH2O-ით და გამოყენებული სპექტროფოტომეტრის ჩვენებისთვის იწვევს OD260/OD280 დაბალ მნიშვნელობებს.ჩვენ გირჩევთ გამოიყენოთ 10 მმ Tris-HCl, pH 7.5 (რნმ-ის გამორეცხვისთვის RNase-ის გარეშე ddH2O) შედარებით სწორი OD260/OD280 მნიშვნელობების მისაღებად, იხილეთ „რნმ-ის კონცენტრაციისა და გამწმენდის ანალიზი“ მე-19 გვერდზე.
გაწმენდილი რნმ იშლება
გასუფთავებული რნმ-ის ხარისხი დაკავშირებულია ისეთ ფაქტორებთან, როგორიცაა ნიმუშის შენარჩუნება, RNase დაბინძურება და მანიპულირება.
საერთო მიზეზების ანალიზი:
1. ქსოვილის ნიმუშები არ იყო შენახული დროულად შეგროვების შემდეგ.
რეკომენდაცია: თუ ქსოვილის ნიმუშები დროულად არ გამოიყენება შეგროვების შემდეგ, გთხოვთ, დაუყოვნებლივ შეინახოთ ისინი თხევად აზოტში დაბალ ტემპერატურაზე ან გადაიტანეთ -80°C-ზე ხანგრძლივი შენახვისთვის თხევად აზოტში სწრაფი გაყინვის შემდეგ, ან დაუყოვნებლივ ჩაეფლოთ რნმ-ის სტაბილიზატორის RNA ხსნარში (ცხოველის ნიმუშები).რნმ-ის ექსტრაქციისთვის შეეცადეთ გამოიყენოთ ახლად შეგროვებული ქსოვილის ნიმუშები.
2.ქსოვილის ნიმუშების განმეორებითი გაყინვა და დათბობა.
შემოთავაზება: ქსოვილის ნიმუშების შენახვისას უმჯობესია დაჭრათ ისინი შესანარჩუნებლად პატარა ნაჭრებად და გამოყენებისას მათი ნაწილი ამოიღოთ, რათა თავიდან აიცილოთ რნმ-ის დეგრადაცია, რომელიც გამოწვეულია ნიმუშების განმეორებითი გაყინვით და დნობით.
3.RNase შეყვანილია საოპერაციო ოთახში ან არ აცვიათ ერთჯერადი ხელთათმანები, ნიღბები და ა.შ.
შემოთავაზება: რნმ-ის ექსტრაქციის ექსპერიმენტები საუკეთესოდ ჩატარდება რნმ-ის ცალკეულ ოპერაციებში და ლაბორატორიული მაგიდა უნდა გაიწმინდოს ექსპერიმენტამდე, ხოლო ექსპერიმენტის დროს უნდა ატაროთ ერთჯერადი ხელთათმანები და ნიღბები, რათა თავიდან იქნას აცილებული რნმ-ის დეგრადაცია, რომელიც გამოწვეულია RNase-ს შეყვანით.
4. გამოყენებისას რეაგენტი დაბინძურებულია RNase-ით.
შემოთავაზება: ჩაანაცვლეთ მცენარეთა მთლიანი რნმ-ის ექსტრაქციის ნაკრების ახალი სერიით შესაბამისი ექსპერიმენტებისთვის.
5. ცენტრიფუგის მილები და პიპეტების წვერები, რომლებიც გამოიყენება რნმ-ით მანიპულირებისთვის, დაბინძურებულია RNase-ით.
შემოთავაზება: დარწმუნდით, რომ ცენტრიფუგის მილები, პიპეტების წვერები, პიპეტები და ა.შ., რომლებიც გამოიყენება რნმ-ის ექსტრაქციაში, არ შეიცავს RNase-ს.
ინსტრუქციის სახელმძღვანელოები:
Plant Total RNA Isolation Kit Plus ინსტრუქციის სახელმძღვანელო
