ავტორები: ვანგ სიაოიანი, ჟაო ერიუ

განყოფილება: Jiaozhou Hospital, Dongfang Hospital, რომელიც დაკავშირებულია ტონჯის უნივერსიტეტთან

ამჟამად, რესპირატორული პათოგენის ნუკლეინის მჟავის გამოვლენის ძირითადი ნიმუში არის ყელის ნაცხი.არსებობს მრავალი სახის საყოველთაოდ გამოყენებული ნიმუშის შესანარჩუნებელი ხსნარი, რომლებიც ტრანსპორტირებისა და შესანახად ყველა საჭიროებს მაცივარში ან გაყინვას;შეგროვებისა და ტრანსპორტირების პროცესში ძნელია დაბალი ტემპერატურის მთელი პროცესის კონტროლი და ძნელია ხარისხის კონტროლის უზრუნველყოფა ნიმუშის ტესტირებამდე.^[1-2].

RNase (RNase) არის ენდონუკლეაზა, რომელიც ჰიდროლიზებს რნმ-ს, ძირითადად წყვეტს ფოსფოდიესტერულ კავშირებს ნუკლეოტიდებს შორის.RNase მოლეკულა ძალიან სტაბილურია, სტრუქტურაში არის დისულფიდური ბმები და მისი აქტივობა არ საჭიროებს ორვალენტიანი კათიონების არსებობას, ამიტომ RNase ადვილად დენატურირებული არ არის და მისი რენაცია ადვილია მაღალი ტემპერატურის ან დენატურანტების გამოყენების შემდეგაც კი.RNases იყოფა ენდოგენურ და ეგზოგენურებად.ენდოგენური RNases შეიძლება გამოთავისუფლდეს ამავე დროს, როდესაც უჯრედები იშლება.ამიტომ, ენდოგენური RNase-ების როლის აღმოფხვრა ძალიან კრიტიკული ნაბიჯია რნმ-ის ექსტრაქციის პროცესში.ეგზოგენური RNases ფართოდ არის გავრცელებული.RNases არსებობს ჰაერში, ადამიანის კანში, თმასა და ნერწყვში, რაც მნიშვნელოვანი მიზეზია რნმ-ის ადვილად დეგრადაციისთვის.^[3].

მონაცემთა მოთხოვნა

CANS-CL02-A009 „სამედიცინო ლაბორატორიის ხარისხისა და კომპეტენციის აკრედიტაციის სახელმძღვანელოს გამოყენება მოლეკულური დიაგნოსტიკის სფეროში“ ტექნიკურ მოთხოვნებში გვთავაზობს წყლის ხარისხის შესაბამისი სტანდარტების ფორმულირებას განაცხადის მიხედვით;ერთჯერადი ჰერმეტული კონტეინერები:

RNase/კლასიფიკაცია

(1) RNase A

რიბონუკლეაზა A (RNase A), მიღებული მსხვილფეხა რქოსანი პანკრეასისგან, არის ენდორიბონუკლეაზა, რომელსაც შეუძლია შეტევა რნმ-ზე პირიმიდინის ნარჩენების 3' ბოლოზე, ჭრის ციტოზინს ან ურაცილს, რომელიც წარმოიქმნება მიმდებარე ნუკლეოტიდებით.ფოსფოდიესტერული ბმა, რეაქციის საბოლოო პროდუქტი არის 3'პირიმიდინის ნუკლეოტიდი და ოლიგონუკლეოტიდი 3'პირიმიდინის ნუკლეოტიდით ბოლოში.

(2) RNase T1

რიბონუკლეაზა T1 (RNase T1) მიღებულია Aspergillus orjzae-დან, ის კონკრეტულად მოქმედებს გუანინის 3'-ტერმინალურ ფოსფატზე და გაყოფის ადგილი არის გუანინის 3' ფოსფატსა და მიმდებარე ნუკლეოტიდების 5' ჰიდროქსილს შორის.რეაქციის საბოლოო პროდუქტია 3'გუანილის მჟავა და ოლიგონუკლეოტიდის ფრაგმენტები ბოლოში 3'გუანილის მჟავით.

(3) RNase H

რიბონუკლეაზა H (RNase H) პირველად ხბოს თიმუსის ქსოვილიდან აღმოაჩინეს და მისი კოდირების გენი კლონირებულ იქნა Escherichia coli-ში.მას შეუძლია კონკრეტულად დაშალოს დნმ: რნმ-ის ჯაჭვები რნმ-ის ჰიბრიდულ დუპლექსებში, რის შედეგადაც წარმოიქმნება ოლიგონუკლეოტიდები და მონონუკლეოტიდები 3'-OH და 5'-მონოფოსფატური ბოლოებით, მას არ შეუძლია დაშალოს ერთჯერადი ან ორჯაჭვიანი დნმ ან რნმ.

RNase

ფუნქცია და გამოყენება

რიბონუკლეაზას შეუძლია რიბონუკლეინის მჟავის (რნმ) დეგრადაციის კატალიზება და ხელოვნურად სინთეზირება.სამკურნალო მალამო ადგილობრივად გამოიყენება ტრავმისა და სახსრების ტკივილის სამკურნალოდ.ანგარიშების თანახმად, რიბონუკლეაზას შეუძლია შეცვალოს მასპინძელი უჯრედის მეტაბოლიზმი, დათრგუნოს ვირუსის სინთეზი, დათრგუნოს გრიპის ვირუსის გამრავლება in vitro და შეაფერხოს ვაქცინიისა და ჰერპესის ვირუსის წარმოქმნა ქათმის ემბრიონებში.რიბონუკლეაზას ყოველდღიური ინტრამუსკულური ინექციით 180 მგ კლინიკური გამოყენება, რომელიც სასარგებლოა ეპიდემიური ენცეფალიტის სამკურნალოდ, რიბონუკლეაზას შეუძლია რიბონუკლეინის მჟავის (რნმ) დეგრადაციის კატალიზება და ახლა შეიძლება ხელოვნურად სინთეზირებული იყოს.სამკურნალო მალამო ადგილობრივად გამოიყენება ტრავმისა და სახსრების ტკივილის სამკურნალოდ.ანგარიშების თანახმად, რიბონუკლეაზას შეუძლია შეცვალოს მასპინძელი უჯრედის მეტაბოლიზმი, დათრგუნოს ვირუსის სინთეზი, დათრგუნოს გრიპის ვირუსის გამრავლება in vitro და შეაფერხოს ვაქცინიისა და ჰერპესის ვირუსის წარმოქმნა ქათმის ემბრიონებში.რიბონუკლეაზას 180 მგ ყოველდღიური ინტრამუსკულური ინექციის კლინიკური გამოყენება სასარგებლოა ეპიდემიური ენცეფალიტის სამკურნალოდ.

RNase

ინჰიბიტორის განმარტება

RNase ინჰიბიტორის ერთეულის განმარტება: ფერმენტის რაოდენობა, რომელიც საჭიროა 5ng RNase A-ს აქტივობის 50%-ის დასათრგუნავად არის ერთი ერთეული.

როგორ მუშაობს RNase ინჰიბიტორები

გუანიდინის იზოთიოციანატი:

გუანიდინის იზოთიოციანატი არის ორგანული ნაერთი მოლეკულური ფორმულით C2H6N4S.ძირითადად გამოიყენება ბიოლოგიურ მედიცინაში, ქიმიურ რეაგენტებში და ა.შ. გუანიდინის იზოთიოციანატი არის ცილის ლიზინგის აგენტი და ხშირად გამოიყენება როგორც ლიზისის ხსნარის ძირითადი კომპონენტი მოლეკულურ სადიაგნოსტიკო რეაგენტებში.მას შეუძლია ქსოვილის ლიზირება, უჯრედის სტრუქტურის განადგურება და ნუკლეინის მჟავის დაშორება ნუკლეოპროტეინებისგან და აქვს ძლიერი დენატურაცია RNase-მდე.ეს არის ყველაზე ეფექტური RNase ინჰიბიტორი ამჟამად.

TRIZol არის ახალი მთლიანი რნმ-ის ექსტრაქციის რეაგენტი, რომელსაც შეუძლია პირდაპირ ამოიღოს მთლიანი რნმ უჯრედებიდან ან ქსოვილებიდან.ის შეიცავს ისეთ ნივთიერებებს, როგორიცაა ფენოლი და გუანიდინის იზოთიოციანატი, რომელსაც შეუძლია სწრაფად დაარღვიოს უჯრედები და დათრგუნოს უჯრედების მიერ გამოთავისუფლებული ნუკლეაზები.

(თუმცა, გუანიდინის იზოთიოციანატი საშიშია ლაბორატორიის მკვლევარების ჯანმრთელობისთვის.)

RNasin:

მჟავა გლიკოპროტეინი ამოღებული ვირთხის ღვიძლის ან ადამიანის ბლასტოდერმიდან.რნაზინი არის RNase-ის არაკონკურენტული ინჰიბიტორი, რომელსაც შეუძლია დაუკავშირდეს სხვადასხვა RNase-ებს მათი ინაქტივაციის მიზნით.

(დამატებითი ინფორმაცია: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hმაღალი ტემპერატურა:

მაღალი ტემპერატურა ასევე ცილის დენატურაციის ჩვეულებრივი საშუალებაა.

დიეთილპიროკარბონატი (DEPC):

DEPC არის ძლიერი, მაგრამ არასრული RNase ინჰიბიტორი, რომელსაც შეუძლია დათრგუნოს RNase აქტივობა RNase აქტიური ჯგუფის ამინომჟავის იმიდაზოლის რგოლთან კომბინირებით ცილების დენატურაციისთვის.

ვანადილის რიბონუკლეოზიდის კომპლექსი:

ვანადიუმის ოქსიდის იონებისა და ნუკლეოზიდების მიერ წარმოქმნილი კომპლექსი, რომელიც უკავშირდება RNase-ს გარდამავალი ნივთიერებების სახით, რომელსაც შეუძლია თითქმის მთლიანად დათრგუნოს RNase-ს აქტივობა.

სხვა:

RNase-ზე გარკვეული ინჰიბიტორული ეფექტი აქვს ასევე SDS-ს, შარდოვანას, დიატომაზე და სხვ.

საექსპერტო მიმოხილვები

Li Yujie მთავარი ტექნიკოსი

ტონჯის უნივერსიტეტთან აფილირებული დონგფანგის საავადმყოფოს ჯიაოჟოუს საავადმყოფოს ლაბორატორიული განყოფილების დირექტორი

ეგზოგენური RNase-ის ბიოდეგრადაციის თავიდან ასაცილებლად, ნიღბები, ხელთათმანები და ქუდები უნდა იყოს ტარება და ხშირად გამოცვლა რნმ-ის ექსტრაქციის პროცესში.ყველა მინის ჭურჭელი უნდა იყოს გამომცხვარი საშრობ ღუმელში 200°C ტემპერატურაზე 2 საათზე მეტი ხნის განმავლობაში.გამოცხობისთვის გამოყენებული მასალები, როგორიცაა პლასტმასი, უნდა დამუშავდეს DEPC წყლით და შემდეგ დაიბანოთ გამოხდილი წყლით.რეაგენტები ან მოწყობილობები, რომლებიც გამოიყენება რნმ-ის ექსტრაქციის, შენარჩუნებისა და იდენტიფიკაციისთვის, უნდა მიეძღვნას რნმ-ს და უნდა შეიქმნას რნმ-ის დამოუკიდებელი მოქმედების არეალი.

ცნობები:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.ბაქტერიები და ვირუსები ნაზოფარინქსში, ქვედა სასუნთქი გზების მწვავე ინფექციების დაწყებამდე ძირძველ ავსტრალიელ ბავშვებში[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] ჩინეთის პრევენციული მედიცინის ასოციაციის ჰოსპიტალური ინფექციების კონტროლის ფილიალი.გაიდლაინები კლინიკური მიკრობული ნიმუშების შეგროვებისა და შემოწმებისთვის [J].საავადმყოფოს ინფექციის ჩინური ჟურნალი, 2018 (20): 3192-3200.

[3] „კლინიკური ტესტი ათი ათასი რატომ მოლეკულური ბიოლოგიის ტესტის მოცულობა“