შესაძლო პრობლემების შემდეგი ანალიზიბუკალურიტამპონი/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.
გამწმენდი სვეტი ჩაკეტილია
ამ კომპლექტში, გენომიური დნმ-ის ექსტრაქციის ოპერაციაში, გამწმენდი სვეტი პირდაპირ შეიწოვება ნიმუშის ფერმენტული ლიზისის ნარევზე ცენტრიფუგაციის საფეხურის გარეშე და გამწმენდი სვეტი შეიძლება დაიბლოკოს არასრული ფერმენტიზაციისა და ნიმუშის მაღალი სიბლანტის გამო.
შემდეგი შესაძლო მიზეზები შემდეგია:
1. ქსოვილის ნიმუშების არასრული ფერმენტული მონელება.
რეკომენდაცია: Foregene Protease-ის ნიმუშის დამუშავების დრო შეიძლება სათანადოდ გაგრძელდეს ან სუპერნატანტის მიღება შეიძლება ცენტრიფუგაციის შემდეგ 12000 rpm-ზე (~13400).× ზ) 5 წთ.
2. ქსოვილის ნიმუშების ან დიდი ქსოვილების გადაჭარბებული გამოყენება.
რეკომენდაცია: უმჯობესია არ აღემატებოდეს 1-სბუკალური ტამპონი ნიმუშში;თუ ნიმუში ძალიან დიდია, შესაბამისად გაზარდეთ ბუფერი ST1, Foregene Protease, ბუფერი ST2-ის დოზა.
3. ნიმუშის სიბლანტე ძალიან მაღალია.
რეკომენდაცია: ნიმუშები შეიძლება სათანადოდ განზავდეს 10 მმ Tris-HCl-ით გენომიური დნმ-ის ექსტრაქციამდე.
4. სისხლის ბარათის ფრაგმენტები შეწოულია.
რეკომენდაცია: სისხლის ლაქების (FTA Card) გენომური ექსტრაქციის მე-6 საფეხურის გარდამავალი ცენტრიფუგაციის დრო სათანადოდ შეიძლება გაგრძელდეს.
დაბალი მოსავლიანობა ან დნმ-ის არარსებობა
ხშირად არსებობს სხვადასხვა ფაქტორები, რომლებიც გავლენას ახდენენ გენომიურ დნმ-ზე, მათ შორის ნიმუშის წარმოშობა, ნიმუშის შენახვის პირობები, ნიმუშის მომზადება, მანიპულირება და ა.შ.
გენომის დნმ-ის მიღება შეუძლებელია ექსტრაქციის დროს
შესაძლო მიზეზები შემდეგია:
1. ნიმუშების არასათანადო შენახვა ან ძალიან დიდი ხნის განმავლობაში შენახვა იწვევს გენომის დნმ-ის დეგრადაციას.
რეკომენდაცია: პირის ღრუს ნაცხი სასურველია იყოს ახლად აღებული და არ არის მიზანშეწონილი კონსერვირებული ნაცხის გამოყენება გენომიური დნმ-ის ექსტრაქციის ოპერაციებისთვის;სისხლის ლაქების ნიმუშებმა უნდა უზრუნველყოს ხარისხის ხარისხი და შენახვის დრო არ უნდა იყოს ძალიან დიდი.
2. ქსოვილის ძალიან მცირე გამოყენებამ შეიძლება გამოიწვიოს შესაბამისი გენომის დნმ-ის ამოღება.
რეკომენდაცია: დაიცავითბუკაl ამოიღეთ ნაცხის აღების ინსტრუქციები ოპერაციის სახელმძღვანელოში და წაშალეთ რაც შეიძლება ბევრჯერ ისე, რომ საკმარისი უჯრედები მიმაგრდეს პირის ღრუს ნაცხზე გენომიური დნმ-ის ექსტრაქციისთვის;სისხლის ლაქების ნიმუშის ამოღების მიზნით, სისხლის ლაქების ამოჭრის ფართობი შეიძლება სათანადოდ გაიზარდოს.
3. Foregene Protease არასწორად არის დაცული, რაც იწვევს მისი აქტივობის დაქვეითებას ან ინაქტივაციას.
რეკომენდაცია: დაადასტურეთ შენახვის პირობებიფoregene Protease ან შეცვალეთ იგი ახალი Foregene Protease-ით ფერმენტული რეაქციისთვის.
4. ნაკრების არასწორად შენახვა ან შენახვის დრო ძალიან დიდია, რაც იწვევს კომპლექტში ზოგიერთი კომპონენტის უკმარისობას.
რეკომენდაცია: შეიძინეთ ახალიბუკალური ნაცხის დნმიზოლაცია ნაკრები დაკავშირებული პროცედურებისთვის.
5. ბუფერი WB არ ამატებს აბსოლუტურ ეთანოლს.
რეკომენდაცია: დაადასტურეთ, რომ ბუფერული WB ამატებს აბსოლუტური ეთანოლის სწორ მოცულობას.
6. ელუენტი სწორად არ არის დამატებული სილიკონის ფილაში.
რეკომენდაცია: დაამატეთ 65°Cწინასწარ გახურებული ელუენტი წვეთება სილიკონის მემბრანის შუაში და დატოვეთ ოთახის ტემპერატურაზე 5 წუთის განმავლობაში, რათა გაიზარდოს გამორეცხვის ეფექტურობა.
Low-yield გენომიური დნმ იზოლირებული
შემდეგი შესაძლო მიზეზები შემდეგია:
1. ნიმუშების არასათანადო შენახვა ან ძალიან დიდი ხნის განმავლობაში შენახვა იწვევს გენომის დნმ-ის დეგრადაციას.
რეკომენდაცია: პირის ღრუს ნაცხი სასურველია იყოს ახლად აღებული და კონსერვირებული ნაცხი არ უნდა იქნას გამოყენებული გენომიური დნმ-ის ექსტრაქციისთვის.
2. თუ ქსოვილის ნიმუშის რაოდენობა ძალიან მცირეა, ამოღებული გენომიური დნმ-ის შემცველობა ნაკლები იქნება.
რეკომენდაცია: მიჰყევით ინსტრუქციას პირის ღრუს ნაცხის აღების ინსტრუქციებში საოპერაციო სახელმძღვანელოში, წაშალეთ რაც შეიძლება ბევრჯერ ისე, რომ პირის ღრუს ნაცხზე საკმარისი უჯრედები მიმაგრდეს გენომიური დნმ-ის ექსტრაქციისთვის.
3. Foregene Protease არასწორად არის დაცული, რაც იწვევს მისი აქტივობის დაქვეითებას ან ინაქტივაციას.
რეკომენდაცია: დაადასტურეთ შენახვის პირობებიthe Foregene Protease ან შეცვალეთ იგი ახლით Foregene Protease ფერმენტული რეაქციისთვის.
4. ელუენტის პრობლემები.
რეკომენდაცია: გამორეცხვისთვის გამოიყენეთ ბუფერი EB;თუ იყენებთ ddH2O ან სხვა ელუენტები, დაადასტურეთ, რომ ელუატის pH არის 7.0-8.5 შორის.
5. ელუატი არ არის სწორად დამატებული წვეთით.
რეკომენდაცია: დაამატეთ ელუენტის წვეთები სილიკონის მემბრანის შუაში და დატოვეთ ოთახის ტემპერატურაზე 5 წუთის განმავლობაში, რათა გაიზარდოს გამორეცხვის ეფექტურობა.
6. გამორეცხვის სითხე ძალიან ცოტა გროვდება.
რეკომენდაცია: გამოიყენეთ ელუენტი გენომიური დნმ-ის გამორეცხვისთვის, როგორც ეს საჭიროა ინსტრუქციებში, მინიმუმარანაკლები ვიდრე 15μl.
Lუი სიწმინდე of გენომიური დნმიზოლირებული
გენომური დნმ-ის დაბალმა სისუფთავემ შეიძლება გამოიწვიოს ექსპერიმენტების წარუმატებლობა ან არადამაკმაყოფილებელი შედეგები, როგორიცაა: ფერმენტების გახსნა შეუძლებელია, PCR ვერ მიიღებს საინტერესო გენის ფრაგმენტს და ა.შ.
შესაძლო მიზეზები შემდეგია:
1. ჰეტეროპროტეინით დაბინძურება, რნმ დაბინძურება.
ანალიზი: გამწმენდი სვეტი არ იყო გარეცხილი ბუფერული PW გამოყენებით;ბუფერული PW სარეცხი გამწმენდი სვეტი არ იყო გარეცხილი სწორი ცენტრიდანული სიჩქარით.
რეკომენდაცია: ეთანოლის დამატებამდე დარწმუნდით, რომ არ იყოს ნალექი ზედაპირში;დარწმუნდით, რომ გარეცხეთ გამწმენდი სვეტი ინსტრუქციის მიხედვით და ამ ნაბიჯის გამოტოვება არ შეიძლება.
2. მინარევებისაგან იონური დაბინძურება.
ანალიზი: ბუფერული WB სარეცხი გამწმენდი სვეტი გამოტოვებულია ან გარეცხილია მხოლოდ ერთხელ, რამაც გამოიწვია იონური დაბინძურება.
რეკომენდაცია: დარწმუნდით, რომ გარეცხეთ Buffer WB 2-ჯერ მითითების შესაბამისად, რათა მაქსიმალურად მოიცილოთ ნარჩენი იონები.
3. რნმ ფერმენტის დაბინძურება.
ანალიზი: უცხოური RNase დაემატა ბუფერს;ბუფერული PW სარეცხი ოპერაცია არასწორი იყო, რამაც გამოიწვია RNase ნარჩენები, რომლებიც გავლენას ახდენდნენ რნმ-ის ქვედა დინების ექსპერიმენტულ ოპერაციებზე, როგორიცაა ინ ვიტრო ტრანსკრიფცია.
რეკომენდაცია: Foregene სერიის ნუკლეინის მჟავაიზოლაtion კომპლექტებს შეუძლიათ ამოიღონ რნმ RNase დამატებითი დამატების გარეშე,ამგვარად ბუკალური ნაცხის/FTA ბარათის დნმ-ის იზოლაციის ნაკრებისაჭირო't დაამატეთ RNase;დარწმუნდით, რომ მიჰყევით ინსტრუქციას Buffer PW სარეცხი გამწმენდი სვეტისთვის და ამ ნაბიჯის გამოტოვება შეუძლებელია.
4. ეთანოლის ნარჩენი.
ანალიზი: ბუფერმა WB არ ჩაატარა ცარიელი მილის ცენტრიფუგაცია გამწმენდი სვეტის გარეცხვის შემდეგ.
რეკომენდაცია: შეასრულეთ სწორი ცარიელი მილის ცენტრიფუგაციის ოპერაცია ინსტრუქციის მიხედვით.
5. სხვა მინარევებისაგან დაბინძურება.
ანალიზი: შენახული ნიმუშები ან სპეციალური ნიმუშები არ არის წინასწარ დამუშავებული.
რეკომენდაცია: საფუძვლიანად მოამზადეთ ნიმუში ინსტრუქციის მიხედვით.
გამოქვეყნების დრო: მარ-18-2022
