PCR რეაქციის გამორჩეული თვისებაა მისი დიდი ამპლიფიკაციის უნარი და უკიდურესად მაღალი მგრძნობელობა.PCR შესრულებისა და გამოვლენის ეფექტურობის გასაუმჯობესებლად, ჩვენ მზად ვართ გავაუმჯობესოთ PCR გამაძლიერებელი შესაძლებლობები და გამოვლენის მგრძნობელობა, მაგრამ თავის ტკივილი ექსპერიმენტის პროცესშია.ხშირად ჩნდება ცრუ დადებითი და ძალიან მცირე რაოდენობის ნიმუშის ჯვარედინი დაბინძურება ან PCR პროდუქტის დაბინძურება შეიძლება გამოიწვიოს ცრუ დადებითი ექსპერიმენტში.
PCR პროდუქტის დაბინძურების ხუთი ტიპი
PCR დაბინძურების მრავალი მიზეზი არსებობს, რომლებიც უხეშად შეიძლება დაიყოს შემდეგ კატეგორიებად:
ნიმუშის დაბინძურება ძირითადად გამოწვეულია ნიმუშის შესაგროვებელი ჭურჭლის დაბინძურებით, ან ნიმუშის მოთავსებისას იგი ჭურჭლიდან გაჟონავს ფხვიერი დალუქვის გამო, ან ნიმუში ეკვრება კონტეინერის გარე მხარეს, რაც იწვევს ჯვარედინი დაბინძურებას;დაბინძურება იწვევს ნიმუშებს შორის დაბინძურებას;ზოგიერთი მიკრობული ნიმუში, განსაკუთრებით ვირუსები, შეიძლება გავრცელდეს აეროზოლებით ან წარმოქმნას აეროზოლები, რამაც შეიძლება გამოიწვიოს ურთიერთდაბინძურება.
მთავარი მიზეზი ის არის, რომ PCR რეაგენტების მომზადებისას სინჯის იარაღი, კონტეინერი, ორმაგი გამოხდილი წყალი და სხვა ხსნარები დაბინძურებულია PCR ნუკლეინის მჟავის შაბლონით.
მოლეკულური ბიოლოგიის ლაბორატორიებში და ზოგიერთ ლაბორატორიაში, რომლებიც იყენებენ კლონირებულ პლაზმიდებს, როგორც დადებით კონტროლს, ასევე ხშირია კლონირებული პლაზმიდური დაბინძურების პრობლემა.იმის გამო, რომ კლონირების პლაზმიდის შემცველობა ერთეული მოცულობით საკმაოდ მაღალია და უფრო მეტი ხელსაწყო და რეაგენტია საჭირო გაწმენდის პროცესში, ხოლო ცოცხალ უჯრედებში პლაზმიდი დიდი ალბათობით დაბინძურდება ცოცხალი უჯრედების ძლიერი ზრდისა და რეპროდუქციის უნარის გამო.
გაძლიერებული პროდუქტების დაბინძურება არის ყველაზე გავრცელებული დაბინძურების პრობლემა PCR რეაქციებში.იმის გამო, რომ PCR პროდუქტის ასლის რაოდენობა დიდია (ზოგადად 1013 ასლი/მლ), რაც ბევრად აღემატება PCR აღმოჩენის ასლის ნომრის ლიმიტს, PCR პროდუქტის დაბინძურების ძალიან მცირე რაოდენობამ შეიძლება გამოიწვიოს ცრუ დადებითი.
აეროზოლური დაბინძურება არის PCR პროდუქტების დაბინძურების ყველაზე სავარაუდო ფორმა და ის ასევე ყველაზე ადვილია შეუმჩნეველი.იგი წარმოიქმნება თხევადი ზედაპირისა და ჰაერის ხახუნის შედეგად.ზოგადად, აეროზოლური დაბინძურება შეიძლება წარმოიქმნას სახურავის გახსნისას, ნიმუშის ასპირაციისას ან მაშინაც კი, როდესაც რეაქციის მილის ძლიერად შერყევა ხდება.გათვლებით, აეროზოლური ნაწილაკი შეიძლება შეიცავდეს 48 000 ეგზემპლარს, ამიტომ მის მიერ გამოწვეული დაბინძურება არის პრობლემა, რომელიც განსაკუთრებულ ყურადღებას იმსახურებს.
კერძოდ, ტესტირების ლაბორატორიები ხშირად იყენებენ პრაიმერების ერთსა და იმავე წყვილს გარკვეული გენის შესამოწმებლად.დროთა განმავლობაში, დიდი რაოდენობით PCR პროდუქტის დაბინძურება მოხდება ლაბორატორიულ სივრცეში.როდესაც ასეთი დაბინძურება მოხდება, ძნელია მისი აღმოფხვრა მოკლე დროში.
პირველი სამი სახის დაბინძურების შემთხვევაში, ჩვენ შეგვიძლია გამოვიყენოთ ეფექტური საშუალებები, რათა თავიდან ავიცილოთ, მაგრამ PCR პროდუქტებით გამოწვეული დაბინძურების პრევენცია რთულია, განსაკუთრებით არასტანდარტული PCR ლაბორატორიების მშენებლობაში.PCR პროცესში, როდესაც პიპეტის წვერი იწოვს და უბერავს სითხეს, და PCR მილის საფარი იხსნება, წარმოიქმნება აეროზოლი.აეროზოლის მიერ გადატანილი დნმ-ის მოლეკულები (ერთ აეროზოლს შეუძლია ათიათასობით დნმ-ის გადატანა) რთულია აღმოფხვრა, რადგან ისინი ჰაერში ცურავს.PCR ექსპერიმენტების შემდეგი რაუნდის დანერგვის შემდეგ, ცრუ დადებითი აუცილებლად მოხდება.
როგორც ქვემოთ მოცემულ სურათზეა ნაჩვენები, უარყოფითმა კონტროლმა ასევე გააძლიერა ინტერესის შესაბამისი დიაპაზონი:
PCR დაბინძურებისა და პრევენციის ამ საკითხის პირველი ნაწილი აქ არის წარმოდგენილი.შემდეგი ნომერი შემოგთავაზებთ მეორე ნაწილს "PCR პროდუქტების დაბინძურების პრევენცია", ასე რომ თვალი ადევნეთ!
გამოქვეყნების დრო: ივლის-25-2017
