ჩამოაყალიბეთ PCR ექსპერიმენტის SOP ექსპერიმენტის პერსონალის ქცევის სტანდარტიზებისთვის.
ექსპერიმენტატორი მკაცრად იცავს საოპერაციო პროცედურებს და ამცირებს PCR დაბინძურებას, რომელიც შეიძლება გამოწვეული იყოს ადამიანის ფაქტორებით ან ხელს უშლის დაბინძურების წარმოქმნას.გარდა ამისა, ექსპერიმენტატორს უნდა ჰქონდეს შესაბამისი პროფესიული ცოდნა და უნარები, მათ შორის შესაბამისი აღჭურვილობის ექსპლუატაციის ცოდნა, სამუშაო პროცესის გარკვევა, დაბინძურების მკურნალობის მეთოდების და ლაბორატორიული ხარისხის კონტროლის მეთოდების დაუფლება და ტესტის შედეგების სწორად ინტერპრეტაცია.
სტანდარტული PCR ლაბორატორიის შექმნა.
PCR ლაბორატორია პრინციპში დაყოფილია ოთხ ზონად, კერძოდ, რეაგენტის მომზადების არეალი, ნიმუშის დამუშავების არეალი, ამპლიფიკაციის არე და ამპლიფიკაციის პროდუქტის ანალიზის არეალი.პირველი ორი ზონა არის წინასწარი გამაძლიერებელი არეები, ხოლო ბოლო ორი ზონა არის გაძლიერების შემდგომი არეები.წინასწარი გამაძლიერებელი ზონა და გაძლიერების შემდგომი ზონა მკაცრად უნდა იყოს გამიჯნული.ექსპერიმენტული მასალები, რეაგენტები, ჩამწერი ქაღალდი, კალმები, საწმენდი მასალები და ა.შ. შეიძლება მიედინება მხოლოდ წინა გამაძლიერებელი უბნიდან გამაძლიერებლის შემდგომ ზონაში, ანუ რეაგენტის მომზადების ზონიდან → ნიმუშის დამუშავების ზონიდან → გამაძლიერებელი ზონიდან → გამაძლიერებელი პროდუქტის ანალიზის ზონაში და არ უნდა მიედინებოდეს უკან.ლაბორატორიაში ჰაერის ნაკადი ასევე უნდა მიედინებოდეს წინა გამაძლიერებელი უბნიდან გაძლიერების შემდგომ ზონაში და არა უკან.იდეალური PCR ლაბორატორიის დიზაინი ნაჩვენებია ქვემოთ:
სურათი A: იდეალური PCR ლაბორატორიის დაყენების რეჟიმი უარყოფითი წნევით ბუფერულ ოთახში
სურათი B: იდეალური PCR ლაბორატორიის დაყენების რეჟიმი დადებითი წნევით ბუფერულ ოთახში
PCR ლაბორატორიის დაყენების დიაგრამები, რომლებიც მოცემულია სურათზე A და B სურათზე, უნდა იყოს უფრო იდეალური დაყენების რეჟიმი და ლაბორატორიას პირობების მქონე შეუძლია მიმართოს ამ რეჟიმს დიზაინისთვის.ჩვეულებრივი ლაბორატორიებისთვის რეკომენდირებულია PCR გამაძლიერებელი არეალის და პროდუქტის ანალიზის არეების გამიჯვნა, ხოლო საფარის გახსნა მაქსიმალურად უნდა შემცირდეს ნიმუშის მომზადების ზონაში და PCR გამაძლიერებლის ზონაში.გახსოვდეთ: პროდუქტებისა და ექსპერიმენტული მარაგების პროდუქტის ანალიზის ზონაში კატეგორიულად აკრძალულია ნიმუშის მომზადების ზონაში და PCR გაძლიერების ზონაში გადატანა.
თუ ლაბორატორია ახორციელებს მხოლოდ PCR გამოვლენას და იდენტიფიკაციას, რეკომენდებულია ფლუორესცენტური რაოდენობრივი PCR-ის გამოყენება ჩვეულებრივი PCR-ის ნაცვლად.
ფლუორესცენციის რაოდენობრივი PCR გამოვლენის შედეგები შეიძლება შეგროვდეს და გაანალიზდეს ფლუორესცენციული სიგნალებით, ამიტომ არ არის საჭირო რეაქციის შემდეგ ელექტროფორეზისთვის სახურავის გახსნა, რაც თავიდან აიცილებს PCR პროდუქტის დაბინძურებას, რომელიც გამოწვეულია რეაქციის პროდუქტების გაჟონვით აეროზოლების წარმოქმნით.თუ გელის ელექტროფორეზის ჩატვირთვის ეტაპზე გაზრდით თავსახურის ღიობების რაოდენობას, შესაძლებელია აეროზოლური დაბინძურება.რეკომენდებულია რაოდენობრივი PCR-ის გამოყენების ხელშეწყობა და ხარისხობრივი PCR თანდათან ჩანაცვლება.
PCR რეაქციისთვის გამოიყენება UNG ანტი-PCR პროდუქტის დაბინძურების სისტემა.
სისტემა იყენებს dUTP-ს ნაცვლად dTTP.PCR რეაქციის შემდეგ, ყველა PCR პროდუქტი (დნმ ფრაგმენტები) ინკორპორირებულია dUTP-თან;PCR რეაქციის შემდეგ რაუნდში, სისტემაში დამატებული UNG ფერმენტი ინკუბირებულია 37°C-ზე 5 წუთის განმავლობაში PCR-მდე, რომელსაც შეუძლია კონკრეტულად დაშალოს dUTP-ის შემცველი დნმ-ის ყველა ფრაგმენტი და შემდეგ განახორციელოს PCR რეაქცია.ამან შეიძლება მთლიანად ამოიღოს PCR პროდუქტებით გამოწვეული აეროზოლური დაბინძურება.ეფექტი ნაჩვენებია ქვემოთ მოცემულ ფიგურაში:
შენიშვნა: პირდაპირი PCR სერიებისთვის შეგიძლიათ აირჩიოთ Foregene-ის ანტი-PCR პროდუქტების დაბინძურების სისტემის სერიის პროდუქტები.შესთავაზეთ
ლაბორატორიებისთვის, რომლებიც ატარებენ ფართომასშტაბიან გენოტიპის ტესტებს, მკაცრად რეკომენდებულია UNG ანტი-PCR პროდუქტის დაბინძურების სისტემის გამოყენება რეაგენტების შესამოწმებლად, გონივრული ლაბორატორიების მშენებლობის გარდა.
შეხსენება: ამ სისტემის გამოყენებამ არ შეიძლება მოხსნას PCR პროდუქტის უკვე გამოწვეული დაბინძურება.ამიტომ, UNG სისტემა უნდა იქნას გამოყენებული შესაბამისი ტესტის დასაწყისში, ხოლო UNG სისტემა უნდა იყოს გამოყენებული PCR გაძლიერებისთვის, რათა თავიდან იქნას აცილებული PCR პროდუქტების დაბინძურება ცრუ დადებითი.
რეკომენდებულია Foregene-ის Direct PCR-UNG სისტემის გამოყენება ფართომასშტაბიანი ტესტირების დროს, როგორიცაა:
მცენარის ფოთლის პირდაპირი PCR Kit-UNG;
მცენარეთა თესლის პირდაპირი PCR Kit-UNG;
ცხოველთა ქსოვილის პირდაპირი PCR Kit-UNG;
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG;
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
კომპლექტების ეს სერია Foregene-სგანშეუძლია არა მხოლოდ სწრაფად და ფართომასშტაბიანი PCR გამოვლენის განხორციელება, არამედ ეფექტური პრევენცია და კონტროლის PCR პროდუქტის დაბინძურება.
გამოქვეყნების დრო: მარ-19-2021
