რამდენი იცი

შესახებ ნუკლეინის მჟავის ექსტრაქცია

გასუფთავებული ნუკლეინის მჟავის დასაწყისი და დასასრული

თავიდან ყველაფერი რთულია, ყველაზე მეტად გაწმენდილი ნუკლეინის მჟავაა

მოლეკულური ექსპერიმენტების დაწყება, შემდგომი ექსპერიმენტებისთვის

წარმატებას ან წარუმატებლობას გადამწყვეტი გავლენა აქვს.

კვალი/ულტრაკვალი ულტრაიისფერი სპექტროფოტომეტრი მომხრეა მრავალი მეცნიერის მიერ, რადგან მას შეუძლია ნუკლეინის მჟავას კონცენტრაციის და ცილის და მარილის იონების ნარჩენების ამოცნობა მარტივად, სწრაფად და ეკონომიურად.

როგორც ყველამ ვიცით, A260 ნიშნავს ნუკლეინის მჟავას შთანთქმის OD მნიშვნელობას, A280 ნიშნავს ცილის კონცენტრაციის შთანთქმას OD მნიშვნელობას, A230 ნიშნავს მარილის იონების კონცენტრაციის შთანთქმას OD მნიშვნელობას, ასე რომ A260-ს შეუძლია გადაიყვანოს ნუკლეინის მჟავას კონცენტრაცია, A260/280 ნიშნავს ცილის ნარჩენს, A260/230 ნიშნავს მარილის იონების ნარჩენებს, ეს მხოლოდ ამ გამოკვლევის წესზეა დაფუძნებული.ჩვეულებრივი”დაჯერება, რომ მას შეუძლია ახსნას დნმ-ისა და რნმ-ის სისუფთავეგარკვეულწილად.ეს არ არის ერთადერთი სტანდარტი ნუკლეინის მჟავას მოსავლიანობისა და სისუფთავის იდენტიფიცირებისთვის, იგი გამოიყენება მხოლოდ როგორც მითითება და არ არის „ოქროს სტანდარტი“.

Thermo Fisher ND-2000 სახელმძღვანელო ხაზს უსვამს ტესტის შედეგების სანდოობას

მიზეზი ის არის, რომ მიკრო/ულტრამიკრო UV სპექტროფოტომეტრის გამოყენებით მიღებული შედეგები მხოლოდ გვერდიდან ასახავს ნუკლეინის მჟავას გამოსავლიანობას და სისუფთავეს და არსებობს მრავალი გავლენის ფაქტორი (ოპტიკური გზა, ნიმუშის მოცულობა, ნიმუშის კონცენტრაცია, pH მნიშვნელობა, სხვა იონები, რომლებიც გავლენას ახდენენ შთანთქმის გაზომვაზე და ა.შ.), გაზომილი OD სიზუსტე სულაც არ არის.ამავდროულად, შთანთქმის მნიშვნელობის განსაზღვრის მასალის სპეციფიკის არარსებობის გამო, ერთჯაჭვიანი დნმ, ორჯაჭვიანი დნმ, რნმ, dNTPs და ზოგიერთ ცილას აქვთ შთანთქმის პიკი 260 ნმ ტალღის სიგრძეზე და მხოლოდ A260-ით განსაზღვრული კონცენტრაცია სულაც არ არის ნამდვილი დნმ ან რნმ.კონცენტრაცია და მისი მთლიანობა და დეგრადაცია შეუძლებელია.

მაშ, როგორ ვიმსჯელოთ ჩვენი გაწმენდილი ნუკლეინის მჟავის ხარისხზე?გარდა მიკრო/ულტრამიკრო ულტრაიისფერი სპექტროფოტომეტრის გამოსავლენად, ისეთი მეთოდები, როგორიცაა აგაროზის გელის ელექტროფორეზი, ასევე საჭიროა ნუკლეინის მჟავის სიწმინდისა და მთლიანობის ვიზუალურად ჩვენებისთვის და კონცენტრაციის გარკვეულწილად მითითებისთვის.ამგვარად, ნუკლეინის მჟავას გამოსავლიანობა და სიწმინდე, რომელიც მიღებულია სხვადასხვა მეთოდის გამოვლენის შედეგებით, სანდოა.

ექსპერიმენტული სქემის შედარება

H1299 უჯრედების გენომიური დნმ ამოღებულია კომპანიის A-ს დნმ-ის ექსტრაქციის ნაკრების გამოყენებით და დაფიქსირდა მნიშვნელოვანი მინარევებისაგან დაბინძურება, რამაც გამოიწვია მაღალი OD მნიშვნელობები

(OD გაზომვის მნიშვნელობა და შესაბამისი ელექტროფეროგრამა)

შეფასების ინდექსი

არსებობს თუ არა „ოქროს სტანდარტი“ ნუკლეინის მჟავას მოსავლიანობისა და ხარისხის ტესტირებისთვის?

რამდენადაც ვიცით, მარტივი, სწრაფი და იაფი მეთოდი არ არსებობს.იქნება ეს სპექტროფოტომეტრი, გელის ელექტროფორეზი თუ მასის სპექტრომეტრია, ისინი ყველა ასახავს ხსნარში ნუკლეინის მჟავის კონცენტრაციას და სისუფთავეს სხვადასხვა ასპექტიდან და ისინი უნდა შეფასდეს ერთმანეთის მითითებით.

საუკეთესო შეფასების ინდექსი ყოველთვის არისშემდგომი ექსპერიმენტული აპლიკაცია.ეს არ ახდენს გავლენას საპირისპირო ტრანსკრიფციის და PCR გაძლიერების ეფექტურობაზე.საიმედო ამპლიფიკაციის პროდუქტების და Ct მნიშვნელობების მიღება და სრული თანმიმდევრობის მიღება თანმიმდევრობით ნუკლეინის მჟავას წარმატებული ექსტრაქციაა.

შეჯამებისთვის, მხოლოდ თანაფარდობის თეორიის შეხედულებას უნდა დაუპირისპირდეს მოსაზრება „კარგი ქვედა დინების ექსპერიმენტული შედეგების, როგორც კარგი მოპოვების პარამეტრების გამოყენება“!

რეკომენდებულია Foregene დნმ-ის რნმ-ის ექსტრაქციის ნაკრები დნმ/რნმ-ის მაღალი სისუფთავის მისაღებად:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/