PCR, მრავალჯერადი PCR, in situ PCR, საპირისპირო PCR, RT-PCR, qPCR (1)-PCR

ჩვენ დავახარისხებთ სხვადასხვა PCR-ის კონცეფციებს, ნაბიჯებსა და დეტალებს

Ⅰ. PCR

პოლიმერაზული ჯაჭვური რეაქცია, რომელსაც PCR-ს უწოდებენ, არის მოლეკულური ბიოლოგიური ტექნოლოგია, რომელიც გამოიყენება დნმ-ის სპეციფიკური ფრაგმენტების გასადიდებლად.ის შეიძლება ჩაითვალოს დნმ-ის სპეციალურ რეპლიკაციად in vitro.დნმ პოლიმერაზა (დნმ პოლიმერაზა I) აღმოაჩინეს ჯერ კიდევ 1955 წელს, ხოლო კლენოუს ფრაგმენტი E. Coli-ს, რომელსაც აქვს ექსპერიმენტული მნიშვნელობა და პრაქტიკულობა, აღმოაჩინა ექიმმა ჰ. კლენოვმა 1970-იანი წლების დასაწყისში, მაგრამ რადგან ეს ფერმენტი არ მოითმენს ტემპერატურას, მაღალ ტემპერატურას შეუძლია მისი გადაგვარება, ასე რომ, ის არ შეესაბამება პოლიმერაზას მაღალი ტემპერატურის დეგენერაციას.დღეს გამოყენებული ფერმენტები (ე.წ. Taq პოლიმერაზა), იზოლირებული იქნა Thermus aquaticus, ცხელი წყაროს ბაქტერიისგან 1976 წელს. მისი დამახასიათებელია, რომ მას შეუძლია გაუძლოს მაღალ ტემპერატურას და არის იდეალური ფერმენტი, მაგრამ ფართოდ გამოიყენება 1980-იანი წლების შემდეგ.PCR-ის ორიგინალური პრიმიტიული პროტოტიპის ორიგინალური კონცეფცია ჰგავს გენის შეკეთებას და კოპირებას, რომელიც შემოგვთავაზა დოქტორმა კჯელ კლეპმა 1971 წელს. მან გამოაქვეყნა პირველი მარტივი და მოკლევადიანი გენის ასლი (მსგავსი PCR-ის პირველი ორი ციკლური რეაქციების).დღეს შემუშავებული PCR შეიმუშავა დოქტორმა კარი ბ. მულისმა 1983 წელს. დოქტორი მულისი იმ წელს ემსახურებოდა PE კომპანიებს, ამიტომ PE-ს განსაკუთრებული სტატუსი აქვს PCR ინდუსტრიაში.დოქტორმა მალისმა ოფიციალურად გამოაქვეყნა პირველი დაკავშირებული ნაშრომი საიქისთან და სხვებთან 1985 წელს. მას შემდეგ, PCR-ის გამოყენება დღეში ათასობით მილის მანძილზეა და დაკავშირებული ნაშრომების ხარისხი შეიძლება ითქვას, რომ მრავალი სხვა კვლევის მეთოდს არასასიამოვნო ხდის.შემდგომში, PCR ტექნოლოგია ფართოდ გამოიყენება ბიოლოგიურ სამეცნიერო კვლევებსა და კლინიკურ აპლიკაციებში, რაც ხდება მოლეკულური ბიოლოგიის კვლევის ყველაზე მნიშვნელოვანი ტექნოლოგია.მალისმა ასევე მოიპოვა 1993 წლის ნობელის პრემია ქიმიაში.

PCRპრინციპი

PCR ტექნოლოგიის ძირითადი პრინციპი დნმ-ის ბუნებრივი რეპლიკაციის პროცესის მსგავსია და მისი სპეციფიკა დამოკიდებულია ოლიგონუკლეოტიდურ პრაიმერზე, რომელიც ავსებს სამიზნე თანმიმდევრობის ორივე ბოლოს.PCR შედგება დეგენერაცია-ანილირება-გაფართოების სამი ძირითადი რეაქციის ეტაპისგან: ① შაბლონის დნმ-ის დეგენერაცია: მას შემდეგ, რაც შაბლონი დნმ გაცხელდება დაახლოებით 93°C-მდე გარკვეული პერიოდის განმავლობაში, ორმაგი დნმ-ის ხსნარი ორჯაჭვიანი დნმ-ისთვის, რომელიც წარმოიქმნება შაბლონის დნმ-ის გაძლიერების PCR გაძლიერებით, გახადეთ იგი პრიმერის შემდეგ მრგვალ რეაქციისთვის.② შაბლონის დნმ-ისა და პრაიმერის შედუღება (ნაერთი): მას შემდეგ, რაც შაბლონი დნმ გაცხელდება და გადაგვარდება ერთ ჯაჭვში, ტემპერატურა ეცემა დაახლოებით 55°C-მდე.პრაიმერის და შაბლონის დნმ-ის ერთჯაჭვის დამატებითი თანმიმდევრობა.③პრაიმერის გაფართოება: დნმ-ის შაბლონი - პრაიმერის შეკავშირება ეფუძნება TaqDNA პოლიმერაზას მოქმედებას, dNTP-ით, როგორც რეაქციის ნედლეულით.შეინარჩუნეთ რეპლიკაციის პრინციპი, შექმენით ახალი ნახევრად რეზერვირებული ასლის ჯაჭვის სინთეზი, რომელიც ავსებს შაბლონის დნმ-ის ჯაჭვს და განმეორებითი ციკლის გადაგვარება-ანილირება-გაფართოება სამი პროცესით შეიძლება მიიღოთ მეტი "ნახევრად რეზერვირებული ასლის ჯაჭვი" და ეს ახალი ჯაჭვი კვლავ ხელმისაწვდომია.მარყუჟის დასრულებას 2-4 წუთი სჭირდება, სამიზნე გენი შეიძლება გაძლიერდეს რამდენიმე მილიონჯერ 2-3 საათში.

სტანდარტულიPCRრეაქციის სისტემა

PCR რეაქციის ხუთი ელემენტი

PCR რეაქციაში ძირითადად ხუთი სახის ნივთიერებაა ჩართული, კერძოდ, პრაიმერი, ფერმენტი, dNTP, შაბლონი და ბუფერი (საჭიროა Mg2+).[PCR პროცედურა]

სტანდარტული PCR პროცესი დაყოფილია სამ ეტაპად

1. დნმ-ის დეგენერაცია (90°C-96°C): ორჯაჭვის დნმ-ის შაბლონები თერმული მოქმედების ქვეშ, წყალბადის ბმები იშლება, წარმოიქმნება ერთჯაჭვიანი დნმ.

2. ანეილირება (25℃ -65℃): სისტემის ტემპერატურა მცირდება, პრაიმერი ერწყმის დნმ-ის შაბლონს ადგილობრივი ორმაგი ჯაჭვის შესაქმნელად.

3. გაფართოება (70℃ -75℃): Taq ფერმენტის მოქმედებით (დაახლოებით 72°C, საუკეთესო აქტივობა), dNTP გამოიყენება როგორც ნედლეული, ვრცელდება პრაიმერის 5′ ბოლოდან → 3′ ბოლოდან, სინთეზი და შაბლონი ავსებენ ერთმანეთს დნმ-ის ჯაჭვს.

ყოველი ციკლი დენატურირებულია, ანელდება და გაფართოებულია, რაც აორმაგებს დნმ-ის შემცველობას.ამჟამად, ხანმოკლე გამაძლიერებელი არეალის გამო, ზოგიერთი PCR შეიძლება განმეორდეს ძალიან მოკლე დროში, მაშინაც კი, თუ Taq ფერმენტის აქტივობა არ არის ოპტიმალური, ასე რომ, ის შეიძლება შეიცვალოს ორ ეტაპად, ანუ ანეილირება და გაფართოება შეიძლება განხორციელდეს ერთდროულად 60°C-65°C ტემპერატურაზე.აწევისა და გაგრილების პროცესის შესამცირებლად და რეაგირების სიჩქარის გასაუმჯობესებლად.

PCR რეაქციის მახასიათებლები

● მაღალი სპეციფიკა

PCR პასუხის სპეციფიკური გადამწყვეტი ფაქტორებია: ①პრაიმერის და შაბლონის დნმ-ის სპეციფიკური კომბინაცია.②ბაზის დაწყვილების პრინციპი.③ TaqDNA პოლიმერაზას სინთეზის რეაქციის ერთგულება.④ სამიზნე გენის სპეციფიკა და კონსერვატიულობა.

მთავარია პრაიმერებისა და შაბლონების სწორი კომბინაცია.პრაიმერისა და შაბლონის შეკვრა და პრაიმერის ჯაჭვის გაფართოება ეფუძნება ტუტე ბაზის შესატყვისობის პრინციპს.პოლიმერაზას სინთეზის რეაქციების ერთგულება და Taq დნმ პოლიმერაზას მაღალი ტემპერატურული წინააღმდეგობა შაბლონისა და პრაიმერის შებოჭვის (ნაერთების) შესაერთებლად რეაქციაში შეიძლება შესრულდეს უფრო მაღალ ტემპერატურაზე.კომბინაციის სპეციფიკა მნიშვნელოვნად გაიზარდა.კლიპს შეუძლია შეინარჩუნოს სისწორის მაღალი ხარისხი.მაღალი კონსერვატიულობითა და მაღალი კონსერვატიულობით სამიზნე გენეტიკური რეგიონის შერჩევით, მისი სპეციფიკა უფრო მაღალია.

● მაღალი მგრძნობელობა

PCR პროდუქტების წარმოების მოცულობა იზრდება ინდექსით, რამაც შეიძლება გააფართოვოს Picker-ის საწყისი შაბლონი (PG=10-12), რათა გაიზარდოს მიკროკონტროლერის დონე მიკროგრამების დონეზე (μg= -6).სამიზნე უჯრედების აღმოჩენა შესაძლებელია 1 მილიონი უჯრედიდან;ვირუსების გამოვლენისას PCR-ის მგრძნობელობამ შეიძლება მიაღწიოს 3 RFU-ს (ცარიელი ლაქების წარმოქმნილი ერთეულები);ბაქტერიულ მეცნიერებაში გამოვლენის მინიმალური მაჩვენებელია 3 ბაქტერია.

● მარტივი და სწრაფი

PCR ასახვა იყენებს მაღალი ტემპერატურის Taq დნმ პოლიმერაზას, რომელიც ამატებს რეაქციის ხსნარს ერთ დროს, ანუ დეგენერაციულ-ანეილის გაფართოების რეაქციას დნმ-ის ამპლიფიკაციის ხსნარზე და წყლის აბაზანის ქვაბზე.ჩვეულებრივ, ამპლიფიკაციის რეაქცია სრულდება 2-დან 4 საათამდე.გაძლიერებული პროდუქტები ზოგადად ანალიზდება ელექტრული მახვილით და არ საჭიროებს იზოტოპების გამოყენებას, რადიოაქტიური დაბინძურების გარეშე და მარტივი რეკლამით.

● ნიმუშის სისუფთავე დაბალია

არ არის საჭირო ვირუსების ან ბაქტერიების და კულტურის უჯრედების გამოყოფა.დნმ-ის ნედლი პროდუქტები და რნმ შეიძლება გამოყენებულ იქნას როგორც გამაძლიერებლები.დნმ-ის გაძლიერების გამოვლენა შეიძლება გამოყენებულ იქნას უშუალოდ კლინიკური ნიმუშების გამოყენებით, როგორიცაა სისხლი, სხეულის სითხე, ხველის სარეცხი სითხე, თმა, უჯრედები და ცოცხალი ქსოვილი.

PCRსაერთო პრობლემები

● ცრუ უარყოფითი, არ არის გაძლიერებული ზოლები

PCR რეაქციის ძირითადი ეტაპები მოიცავს: ① შაბლონის ნუკლეინის მჟავების მომზადებას, ② პრაიმერების ხარისხს და სპეციფიკას, ③ ფერმენტების ხარისხს ④ PCR ციკლის პირობებს.მიზეზის პოვნა ასევე გაანალიზებული და შესწავლილი უნდა იყოს ზემოთ მოცემულ ბმულებზე.

შაბლონები: ① შაბლონი შეიცავს სხვადასხვა პროტეინს, ② თარგი შეიცავს Taq ფერმენტის ინჰიბიტორს, ③ შაბლონის ცილა არ არის აღმოფხვრილი, განსაკუთრებით ქრომოსომაში არსებული ჯგუფის ცილა.⑤ დემინერის ნუკლეინის მჟავას დეგენერაცია არ არის საფუძვლიანი.როდესაც ფერმენტების და პრაიმერების ხარისხი კარგია, არ არსებობს ამპლიფიკაციის ზოლი, რომელიც, სავარაუდოდ, ნიმუშების საჭმლის მომნელებელი დამუშავებაა.შაბლონის ნუკლეინის მჟავას ექსტრაქციის პროცესში რაღაც არასწორია, ამიტომ ეფექტური და სტაბილური მონელების ხსნარის მოსამზადებლად მისი პროცედურა უნდა დაფიქსირდეს და არა თვითნებურად შეიცვალოს.

ფერმენტის ინაქტივაცია: ახალი ფერმენტი ან ძველი და ახალი ფერმენტები ერთად უნდა იქნას გამოყენებული იმის გასაანალიზებლად, ფერმენტის აქტივობა დაკარგულია თუ არასაკმარისი, რაც იწვევს ცრუ უარყოფით შედეგებს.უნდა აღინიშნოს, რომ Taq ფერმენტი ან ეთიდიუმის ბრომიდი ზოგჯერ დავიწყებულია.

პრაიმერი: პრაიმერის ხარისხი, პრაიმერის კონცენტრაცია და სიმეტრიულია თუ არა ორი პრაიმერის კონცენტრაცია.ეს არის PCR წარუმატებლობის საერთო მიზეზი ან მზარდი ზოლი არ არის იდეალური და მიდრეკილი დიფუზური.პრობლემებია ზოგიერთი პარტიული ნომრის პრაიმერების ხარისხთან დაკავშირებით.ორ პრაიმერს აქვს მაღალი კონცენტრაცია და დაბალი კონცენტრაცია, რაც იწვევს დაბალი ეფექტურობის ასიმეტრიულ გაძლიერებას.საწინააღმდეგო ზომებია: ① აირჩიეთ კარგი პრაიმერი ერთეულების სინთეზირებისთვის.② პრაიმერის კონცენტრაცია არა მხოლოდ დამოკიდებულია OD-ის მნიშვნელობაზე, არამედ ყურადღებას აქცევს პრაიმერის ორიგინალურ სითხეს, რათა მოხდეს აგარის შაქრის გელის ელექტროფორეზი.უნდა იყოს პრაიმერის ზოლის ზონა და ორი პრაიმერის სიკაშკაშე უნდა იყოს ზოგადად თანმიმდევრული.ქამარი, PCR შეიძლება ამ დროს ვერ მოხერხდეს და ის უნდა მოგვარდეს პრაიმერის სინთეზის ერთეულით.თუ პრაიმერი მაღალია, სიკაშკაშე დაბალია და მისი კონცენტრაცია უნდა იყოს დაბალანსებული განზავებისას.③ პრაიმერი უნდა გადაიხადოთ და შეინახოთ მაღალ კონცენტრაციაზე, რათა თავიდან აიცილოთ მაცივრის მრავალი გაყინვა ან გრძელვადიანი სამაცივრო ნაწილები, რაც გამოიწვევს პრაიმერის გაფუჭებას და დეგრადაციას.④ პრაიმერის დიზაინი არაგონივრულია, მაგალითად, პრაიმერის სიგრძე არასაკმარისია და პრაიმერებს შორის წარმოიქმნება დი კლასტერი.

Mg2+კონცენტრაცია: Mg2+ion კონცენტრაცია დიდ გავლენას ახდენს PCR გაძლიერების ეფექტურობაზე.გადაჭარბებულმა კონცენტრაციამ შეიძლება შეამციროს PCR გაძლიერების საპირისპირო სქესი.თუ კონცენტრაცია ძალიან დაბალია, PCR გაძლიერების გამომავალი გამომავალი PCR გამაძლიერებელიც კი არღვევს გაფართოების ზოლის გარეშე.

რეაქციის მოცულობის ცვლილება: PCR ამპლიფიკაციისას გამოყენებული მოცულობა არის 20 მულტი, 30 მულტი და 50 მულტი ან 100 მულტი, PCR გამაძლიერებელი განაცხადის დიდი მოცულობა დადგენილია სამეცნიერო კვლევისა და კლინიკური ტესტირების სხვადასხვა მიზნების მიხედვით.მცირე მოცულობების გაკეთების შემდეგ, როგორიცაა 20ul, აუცილებელია საკაბელო კონდიციის გაკეთება ზომის მიღებისას, წინააღმდეგ შემთხვევაში ის ჩაიშლება.

ფიზიკური მიზეზები: ტრანსფორმაცია ძალიან მნიშვნელოვანია PCR გაძლიერებისთვის.თუ დეგენერაციის ტემპერატურა დაბალია, გადაგვარების დრო მოკლეა, სავარაუდოა, რომ მოხდეს ცრუ ნეგატივებში;დამუშავების ძალიან დაბალმა ტემპერატურამ შეიძლება გამოიწვიოს არასპეციფიკური გაძლიერება და შეამციროს სპეციფიური გამაძლიერებელი ეფექტურობა.დიდ გავლენას ახდენს პრაიმერებისა და შაბლონების კომბინაციაზე PCR გაძლიერების ეფექტურობის შესამცირებლად.ხანდახან საჭიროა სტანდარტული თერმომეტრების გამოყენება გაფართოების ან წყალში ხსნადი გაზქურის ცვალებადობის, დუღილისა და გაფართოებული ტემპერატურის გამოსავლენად, რაც არის PCR-ის წარუმატებლობის ერთ-ერთი მიზეზი.

სამიზნე თანმიმდევრობის ვარიანტები: თუ მოხდება სამიზნე თანმიმდევრობა, მუტაცია ან წაშლა, პროტოტიპისა და შაბლონის კომბინაცია გაერთიანდება, ან სამიზნე თანმიმდევრობის არარსებობის გამო, პრაიმერი და შაბლონი დაკარგავენ დამატებით თანმიმდევრობას და მისი PCR გაძლიერება წარმატებული არ იქნება.

● ცრუ დადებითი

PCR გამაძლიერებელი ზოლი, როგორც ჩანს, შეესაბამება სამიზნე მიმდევრობის ზოლს და ზოგჯერ მისი ზოლი უფრო სუფთა და მაღალია.

პრაიმერის დიზაინი არ არის მიზანშეწონილი: შერჩეული ამპლიფიკაციის თანმიმდევრობა და არამიზნობრივი გაძლიერების თანმიმდევრობა ჰომოლოგიურია, ამიტომ PCR გაძლიერებისას, გაძლიერებული PCR პროდუქტები არის არამიზნობრივი თანმიმდევრობა.სამიზნე თანმიმდევრობა ძალიან მოკლეა ან პრაიმერი ძალიან მოკლეა და მიდრეკილია ცრუ დადებითისკენ.საჭიროა ხელახალი დიზაინი.

სამიზნე თანმიმდევრობის ან ამპლიფიკაციის პროდუქტების ჯვარედინი დაბინძურება: ამ დაბინძურების ორი მიზეზი არსებობს: პირველი, მთელი გენომის ან დიდი სეგმენტების ჯვარედინი დაბინძურება, რაც იწვევს ცრუ დადებით შედეგებს.ამ სახის ცრუ დადებითი შეიძლება აღმოიფხვრას შემდეგი მეთოდებით: იყავით ფრთხილად და ნაზად მუშაობის დროს, რათა თავიდან აიცილოთ სამიზნე თანმიმდევრობის ჩასუნთქვა სინჯის იარაღში ან გაფრქვევა ცენტრიდანული მილიდან.გარდა ფერმენტებისა და ნივთიერებებისა, რომლებიც ვერ უძლებენ მაღალ ტემპერატურას, ყველა რეაგენტი ან მოწყობილობა უნდა იყოს დეზინფექცია მაღალი წნევით.ცენტრიდანული მილები და ნიმუშები უნდა იქნას გამოყენებული ერთდროულად.საჭიროების შემთხვევაში, ნიმუშების დამატებამდე, რეაქციის მილი და რეაგენტი ექვემდებარება ულტრაიისფერ სხივებს, რათა გაანადგუროს არსებული ნუკლეინის მჟავა.მეორე, მცირე ფრაგმენტები ჰაერის დაბინძურებაში.ეს პატარა ფრაგმენტები უფრო მოკლეა, ვიდრე სამიზნე თანმიმდევრობა, მაგრამ მათ აქვთ გარკვეული ჰომოლოგია.ის შეიძლება დაერთოს ერთმანეთთან.პრაიმერების შევსების შემდეგ, PCR პროდუქტი შეიძლება გაფართოვდეს, რაც გამოიწვევს ცრუ პოზიტიურ წარმოებას.ის შეიძლება გამოყენებულ იქნას ბუდის PCR მეთოდის შესამცირებლად ან აღმოსაფხვრელად.

● არასპეციფიკური გამაძლიერებელი ზოლის გამოჩენა

ზოლები, რომლებიც გამოჩნდა PCR გაძლიერების შემდეგ, არ შეესაბამება მოსალოდნელ ზომას, ან დიდი ან პატარა, ან ამავე დროს, ან ამავე დროს, სპეციფიკური გამაძლიერებელი ზოლები და არასპეციფიკური გამაძლიერებელი ზოლები.არასპეციფიკური ზოლების გაჩენა არის: პირველი, პრაიმერები არასრულად ავსებენ სამიზნე თანმიმდევრობას, ან პრაიმერის პოლიმერიზაციას ქმნიან დი კლასტერს.მეორე არის ის, რომ MG2+იონების კონცენტრაცია ძალიან მაღალია, ანეილირების ტემპერატურა ძალიან დაბალია და PCR ციკლების რაოდენობა დაკავშირებულია.მეორეც, ფერმენტების ხარისხი და რაოდენობა.ხშირად, ზოგიერთი წყაროს ფერმენტები მიდრეკილია არასპეციალური ზოლებისკენ და სხვა წყაროს ფერმენტები არ გვხვდება.ზოგჯერ ხდება ფერმენტების არასპეციფიკური გაძლიერებაც.საპირისპირო ზომებია: აუცილებლობის შემთხვევაში ხელახალი დიზაინის მიმზიდველობა.შეამცირეთ ფერმენტის რაოდენობა ან შეცვალეთ სხვა წყაროს ფერმენტი.შეამცირეთ პირველადი რაოდენობა, გაზარდეთ შაბლონების რაოდენობა სათანადოდ და შეამცირეთ ციკლების რაოდენობა.სწორად გაზარდეთ ანეილის ტემპერატურა ან გამოიყენეთ ორი ტემპერატურული წერტილის მეთოდი (93°C დეგენერაცია, ანილირება და გახანგრძლივება დაახლოებით 65°C-ზე).

● გამოჩნდეს აქერცლილი ბუქსი ან ნაცხის ლენტი

PCR გამაძლიერებელი ზოგჯერ, როგორც ჩანს, გამოიყენება ან ჭურვივით ან ხალიჩის მსგავსი ქამარი.ამ მიზეზით, ფერმენტების გადაჭარბებული რაოდენობის ან ფერმენტის ცუდი ხარისხის გამო, dNTP კონცენტრაცია ძალიან მაღალია, Mg2+ კონცენტრაცია ძალიან მაღალი, ანეილირების ტემპერატურა ძალიან დაბალია და ციკლების რაოდენობა ძალიან ბევრია.საწინააღმდეგო ზომებია: ① ფერმენტების რაოდენობის შემცირება ან სხვა წყაროს ფერმენტის შეცვლა.②შეამცირეთ dNTP-ის კონცენტრაცია ③ სათანადოდ შეამცირეთ Mg2+ კონცენტრაცია.④ გაზარდეთ შაბლონების რაოდენობა და შეამცირეთ ციკლების რაოდენობა.

მსგავსი პროდუქტები

PCR Heroᴹ (საღებავთან ერთად)

◮ უმაღლესი ერთგულება: 6-ჯერ აღემატება ჩვეულებრივ Taq ფერმენტს;

◮ გაძლიერების უფრო სწრაფი სიჩქარე

◮ შაბლონის მეტი ადაპტირება

◮ გაძლიერების უფრო მაღალი ეფექტურობა

◮ გარემოსადმი ტოლერანტობა უფრო ძლიერია: მოთავსებულია 37°C ტემპერატურაზე ერთი კვირის განმავლობაში, ინარჩუნებს 90%-ზე მეტ აქტივობას;

◮ მას აქვს 5'→3' დნმ პოლიმერაზას აქტივობა და 5'→3' ეგზონუკლეაზას აქტივობა, 3'→5' ეგზონუკლეაზას აქტივობის გარეშე.

PCR Easyᵀᴹ (საღებავებით)

უნიკალური რეაქციის სისტემა და მაღალი ეფექტურობის Taq დნმ პოლიმერაზა აიძულებს PCR რეაქციას ჰქონდეს უფრო მაღალი გამაძლიერებელი ეფექტურობა, სპეციფიკა და მგრძნობელობა.

RT-qPCR Easyᵀᴹ (ერთი ნაბიჯი)-SYBR Green I

◮ ერთსაფეხურიანი ნაკრები აკეთებს საპირისპირო ტრანსკრიფციას და qPCR ორ რეაქციას ერთსა და იმავე მილში, საჭიროა მხოლოდ შაბლონის რნმ-ის, სპეციფიკური PCR პრაიმერების და RNase-ისგან თავისუფალი ddH-ის დამატება₂O.

◮ კომპლექტს შეუძლია სწრაფად და ეფექტურად აანალიზოს ვირუსული რნმ ან კვალი რნმ.

◮ ნაკრები იყენებს უნიკალურ Foregene საპირისპირო ტრანსკრიფციის რეაგენტს და Foregene HotStar Taq დნმ პოლიმერაზას კომბინირებულ უნიკალურ რეაქციის სისტემასთან, რათა ეფექტურად გააუმჯობესოს რეაქციის გამაძლიერებელი ეფექტურობა და სპეციფიკა.

◮ ოპტიმიზებული რეაქციის სისტემა ხდის რეაქციას უფრო მაღალი აღმოჩენის მგრძნობელობის, ძლიერი თერმული სტაბილურობისა და უკეთესი ტოლერანტობის მქონე.

◮ RT-qPCR მარტივი^TM(ერთი ნაბიჯი)-SYBR Green I ნაკრები მოყვება ROX შიდა საცნობარო საღებავს, რომელიც შეიძლება გამოყენებულ იქნას სიგნალის ფონის და სიგნალის შეცდომების აღმოსაფხვრელად ჭაბურღილებს შორის, რაც მოსახერხებელია მომხმარებლებისთვის რაოდენობრივი PCR ინსტრუმენტების სხვადასხვა მოდელებში გამოსაყენებლად.

RT მარტივი^TMII (მასტერ პრემიქსი ამისთვის პირველი ჯაჭვის cDNA სინთეზისთვისრეალურ დროში PCR)

-გდნმ-ის ამოღების ეფექტური უნარი, რომელსაც შეუძლია შაბლონში გდნმ-ის ამოღება 2 წუთში.

- ეფექტური საპირისპირო ტრანსკრიფციის სისტემა, პირველი ჯაჭვის cDNA-ს სინთეზის დასრულებას მხოლოდ 15 წუთი სჭირდება.

-კომპლექსური შაბლონები: შაბლონები მაღალი GC შემცველობით და რთული მეორადი სტრუქტურით, ასევე შეიძლება შეიცვალოს მაღალი ეფექტურობით.

-მაღალი მგრძნობელობის საპირისპირო ტრანსკრიფციის სისტემა, pg დონის შაბლონებს ასევე შეუძლიათ მიიღონ მაღალი ხარისხის cDNA.

- საპირისპირო ტრანსკრიფციის სისტემას აქვს მაღალი თერმული სტაბილურობა, რეაქციის ოპტიმალური ტემპერატურაა 42℃ და მას ჯერ კიდევ აქვს კარგი საპირისპირო ტრანსკრიფციის შესრულება 50℃-ზე.