Ⅰ. რეაქციის სისტემის მგრძნობელობის გაზრდა:

1. ცალკე მაღალი ხარისხის რნმ:

cDNA-ს წარმატებული სინთეზი მოდის მაღალი ხარისხის რნმ-დან.მაღალი ხარისხის რნმ უნდა უზრუნველყოფდეს სულ მცირე ხანგრძლივობის ხანგრძლივობას და არ შეიცავს ინჰიბიტორებს, რომლებიც არ შეიცავს ჩამწერ ფერმენტებს, როგორიცაა EDTA ან SDS.რნმ-ის ხარისხი განსაზღვრავს მიმდევრობის ინფორმაციის მაქსიმალურ მნიშვნელობას, რომლის გადაწერა შეგიძლიათ cDNA-ზე.რნმ-ის გამწმენდის ზოგადი მეთოდი არის იზოოციანატის/აციდოფენოლის გამოყენების ეტაპობრივი მეთოდი.RNase-ს დაბინძურების თავიდან ასაცილებლად, RNase-ით მდიდარი ნიმუშიდან გამოყოფილი რნმ (როგორიცაა პანკრეასი) საჭიროებს ფორმალდეჰიდის შენახვას მაღალი ხარისხის რნმ-ის გადასარჩენად, რაც კიდევ უფრო მეტია გრძელვადიანი შენახვისთვის.ვირთხის ღვიძლიდან ამოღებული რნმ ძირითადად დეგრადირებული იყო წყალში შენახვის ერთი კვირის შემდეგ, ხოლო ვირთხის ელენთადან ამოღებული რნმ სტაბილური დარჩა წყალში შენახვის სამი წლის შემდეგ.გარდა ამისა, 4 კბ-ზე მეტი ტრანსკრიპტები უფრო მგრძნობიარეა RNase-ის დეგრადაციის მიმართ, ვიდრე მცირე ტრანსკრიპტები.შესანახი რნმ-ის ნიმუშის სტაბილურობის გაზრდის მიზნით, რნმ შეიძლება დაიშალოს იონის მეტალმამინში და ინახება -70 °C.თილიდი, რომელიც გამოიყენება რნმ-ის გადასარჩენად, არ უნდა შეიცავდეს სხვადასხვა ობიექტს, რომელიც ანადგურებს რნმ-ს.რნმ, რომელიც მიღებულია პანკრეასისგან, შეიძლება შენახული იყოს მეტალმამინში მინიმუმ ერთი წლის განმავლობაში.როდესაც მზად იქნებით რნმ-ის გამოსაყენებლად, შეგიძლიათ გამოიყენოთ შემდეგი მეთოდები რნმ-ის დასალექად: დაამატეთ NaCl 0,2 მ და ეთანოლის 4-ჯერ მეტი მოცულობით, მოათავსეთ ოთახის ტემპერატურაზე 3-5 წუთი და 10000 × გ ცენტრიდანული 5 წუთის განმავლობაში.

2. გამოიყენეთ საპირისპირო ტრანსკრიპტაზა RNaseH აქტივობის გარეშე (RNaseH-):

RNase ინჰიბიტორები ხშირად ემატება საპირისპირო ტრანსკრიფციის რეაქციებს, რათა გაზარდონ cDNA სინთეზის ხანგრძლივობა და გამოსავალი.RNase ინჰიბიტორი ემატება პირველი ჯაჭვის სინთეზის რეაქციაში ბუფერების და შემცირების აგენტების თანდასწრებით, როგორიცაა DTT, რადგან cDNA-ს სინთეზის პროცესი ახდენს ინჰიბიტორის დენატურაციას, რითაც ათავისუფლებს შეკრულ RNase-ებს, რომლებიც ანადგურებენ რნმ-ს.პროტეინის RNase ინჰიბიტორი მხოლოდ აფერხებს რნმ-ის დეგრადაციას RNase A, B, C-ით და არ აფერხებს RNase-ებს კანზე, ამიტომ სიფრთხილე უნდა იქნას მიღებული, რომ არ მოხდეს RNase-ების შეყვანა თითებიდან ამ ინჰიბიტორების გამოყენების მიუხედავად.

საპირისპირო ტრანსკრიპტაზა კატალიზებს რნმ-ის cDNA-ად გარდაქმნას.ორივე M-MLV და AMV აქვთ ენდოგენური RNaseH აქტივობა, გარდა საკუთარი პოლიმერაზული აქტივობისა.RNaseH აქტივობა კონკურენციას უწევს პოლიმერაზას აქტივობას ჰეტეროზიგოტური ჯაჭვებისთვის, რომლებიც წარმოიქმნება რნმ-ის შაბლონებსა და დნმ-ის პრაიმერებს ან cDNA გაფართოების ჯაჭვებს შორის და ანადგურებს რნმ: რნმ-ის ძაფებს დნმ-ის კომპლექსებში.RNaseH აქტივობით დეგრადირებული რნმ-ის შაბლონები აღარ შეიძლება გამოყენებულ იქნას როგორც ეფექტური სუბსტრატები cDNA-ს სინთეზისთვის, რაც ამცირებს cDNA სინთეზის მოსავლიანობას და ხანგრძლივობას.ამრიგად, საპირისპირო ტრანსკრიპტაზას RNaseH აქტივობის აღმოფხვრა ან მნიშვნელოვნად შემცირება იქნება დიდი სარგებელი.

SuperScriptⅡ საპირისპირო ტრანსკრიპტაზა, MMLV რევერსიული ტრანსკრიპტაზა RNaseH- და thermoScript საპირისპირო ტრანსკრიპტაზა, AMV RNaseH- გამოიღო უფრო სრულმეტრაჟიანი cDNA, ვიდრე MMLV და AMV.RT-PCR მგრძნობელობაზე გავლენას ახდენს სინთეზირებული cDNA-ს რაოდენობა.ThermoScript ბევრად უფრო მგრძნობიარეა ვიდრე AMV.RT-PCR პროდუქტების ზომა შემოიფარგლება საპირისპირო ტრანსკრიპტაზას უნარით, მოახდინოს cDNA სინთეზირება, განსაკუთრებით დიდი Cdna-ს კლონირებისას.MMLV-თან შედარებით, SuperScripⅡ მნიშვნელოვნად გაზარდა ხანგრძლივი RT-PCR პროდუქტების მოსავლიანობა.RNaseH-ის საპირისპირო ტრანსკრიპტაზა ასევე ზრდის თერმულ სტაბილურობას, ამიტომ რეაქცია შეიძლება განხორციელდეს ნორმალურზე მაღალ ტემპერატურაზე 37-42℃.შემოთავაზებული სინთეზის პირობებში გამოყენებული იყო ოლიგო(dT) პრაიმერები და 10μCi [alpha-p]dCTP.პირველი ჯაჭვის მთლიანი წარმოება გამოითვალა TCA ნალექების მეთოდით.სრული სიგრძის cDNA გაანალიზდა ზომით დალაგებული ზოლების მოცილებისა და ტუტე აგაროზის გელში დათვლის გამოყენებით.

3. გაზარდეთ საპირისპირო ტრანსკრიფციის სითბოს შენარჩუნების ტემპერატურა:

უფრო მაღალი შეკავების ტემპერატურა ხელს უწყობს რნმ-ის მეორადი სტრუქტურის გახსნას და რეაქციის გამომუშავების გაზრდას.რნმ-ის შაბლონების უმეტესობისთვის, რნმ-ის და პრაიმერის შენახვა 65°C-ზე ბუფერისა და მარილის გარეშე და შემდეგ მათი სწრაფად გაცივება ყინულზე გამორიცხავს მეორადი სტრუქტურების უმეტესობას და აძლევს პრაიმერებს შეკავშირების საშუალებას.თუმცა, ზოგიერთ შაბლონს ჯერ კიდევ აქვს მეორადი სტრუქტურა, თუნდაც თერმული დენატურაციის შემდეგ.ამ რთული შაბლონების გაძლიერება შეიძლება განხორციელდეს ThermoScript საპირისპირო ტრანსკრიპტაზას გამოყენებით და უკუ ტრანსკრიპტაზას რეაქციის მაღალ ტემპერატურაზე განთავსებით ამპლიფიკაციის გასაუმჯობესებლად.შენარჩუნების მაღალმა ტემპერატურამ ასევე შეიძლება გაზარდოს სპეციფიკა, განსაკუთრებით მაშინ, როდესაც cDNA სინთეზი ხორციელდება გენის სპეციფიკური პრაიმერების (GSPS) გამოყენებით (იხ. თავი 3).თუ იყენებთ GSP-ს, დარწმუნდით, რომ პრაიმერის Tm მნიშვნელობა იგივეა, რაც მოსალოდნელია შენახვის ტემპერატურა.არ გამოიყენოთ ოლიგო(dT) და შემთხვევითი პრაიმერები 60℃ ზევით.შემთხვევითი პრაიმერები უნდა შენარჩუნდეს 25℃-ზე 10 წუთის განმავლობაში, სანამ გაიზრდება 60℃-მდე.საპირისპირო ტრანსკრიფციის უფრო მაღალი ტემპერატურის გამოყენების გარდა, სპეციფიკა შეიძლება გაუმჯობესდეს რნმ/პრაიმერის ნარევის პირდაპირი გადატანით 65℃ დენატურირების ტემპერატურიდან საპირისპირო ტრანსკრიფციის შენარჩუნების ტემპერატურაზე და წინასწარ გახურებული 2× რეაქციის ნარევის დამატებით (cDNA თერმული დაწყების სინთეზი).ეს მიდგომა ეხმარება თავიდან აიცილოს ინტერმოლეკულური ბაზის დაწყვილება, რომელიც ხდება დაბალ ტემპერატურაზე.PCR ინსტრუმენტის გამოყენება ამარტივებს RT-PCR-სთვის საჭირო ბევრ ტემპერატურულ გადამრთველს.

Tth სითბოს სტაბილიზირებული პოლიმერაზა მოქმედებს როგორც დნმ პოლიმერაზა Mg2+ და რნმ პოლიმერაზას თანდასწრებით Mn2+ თანდასწრებით.მას შეუძლია შეინარჩუნოს სითბო 65℃-მდე.თუმცა, PCR-ის დროს Mn2+-ის არსებობა ამცირებს ერთგულებას, რაც Tth პოლიმერაზას ნაკლებად შესაფერისს ხდის მაღალი სიზუსტის გაძლიერებისთვის, როგორიცაა cDNA კლონირება.გარდა ამისა, Tth ნაკლებად ეფექტურია საპირისპირო ტრანსკრიფციაში, რაც ამცირებს მგრძნობელობას და ვინაიდან ერთ ფერმენტს შეუძლია შეასრულოს საპირისპირო ტრანსკრიფცია და PCR, საკონტროლო რეაქციები საპირისპირო ტრანსკრიფციის გარეშე არ შეიძლება გამოყენებულ იქნას cDNA-ს გაძლიერებული პროდუქტებისგან დაბინძურებული გენომიური დნმ-ისგან განასხვავებლად.

4. დანამატი, რომელიც ხელს უწყობს საპირისპირო ტრანსკრიფციას:

დანამატების, მათ შორის გლიცერინისა და DMSO-ს დამატებამ პირველ ჯაჭვურ სინთეზის რეაქციაში შეიძლება შეამციროს ნუკლეინის მჟავას ორჯაჭვიანი სტაბილურობა და რნმ-ის მეორადი სტრუქტურა.20%-მდე გლიცერინი ან 10% DMSO შეიძლება დაემატოს SuperScriptⅡ ან MMLV აქტივობაზე გავლენის გარეშე.AMV ასევე შეუძლია მოითმინოს 20% გლიცეროლი აქტივობის შემცირების გარეშე.RT-PCR-ის მგრძნობელობის მაქსიმიზაციისთვის SuperScriptⅡ საპირისპირო ტრანსკრიფციის რეაქციაში შეიძლება დაემატოს 10% გლიცეროლი და იზოლირებული იყოს 45℃ ტემპერატურაზე.თუ რეტროტრანსკრიფციული რეაქციის პროდუქტის 1/10 ემატება PCR-ს, გლიცეროლის კონცენტრაცია ამპლიფიკაციის რეაქციაში არის 0,4%, რაც საკმარისი არ არის PCR-ის დასათრგუნავად.

5. RNaseH დამუშავება:

მგრძნობელობა შეიძლება გაუმჯობესდეს cDNA სინთეზის რეაქციების RNaseH-ით დამუშავებით PCR-მდე.ზოგიერთი შაბლონისთვის ითვლება, რომ cDNA სინთეზის რეაქციაში რნმ ხელს უშლის გაძლიერებული პროდუქტების შეკავშირებას, ამ შემთხვევაში RNaseH მკურნალობამ შეიძლება გაზარდოს მგრძნობელობა.ზოგადად, RNaseH მკურნალობა საჭიროა შედარებით გრძელი სრულმეტრაჟიანი cDNA სამიზნე შაბლონის გასაძლიერებლად, როგორიცაა ტუბეროზული სკეროზიⅡ დაბალი ასლით.ამ რთული შაბლონისთვის, RNaseH-მა გააძლიერა სიგნალი, რომელიც გენერირებულია cDNA-ით, რომელიც სინთეზირებულია SuperScriptⅡ ან AMV-ით.RT-PCR რეაქციების უმეტესობისთვის, RNaseH მკურნალობა არჩევითია, რადგან 95℃ იზოლირებული PCR დენატურაციის ეტაპი, როგორც წესი, ჰიდროლიზებს რნმ-ს რნმ: დნმ კომპლექსიდან.

6. გაუმჯობესებული მეთოდები მცირე რაოდენობით რნმ-ის გამოსავლენად:

RT-PCR განსაკუთრებით რთულია, როდესაც ხელმისაწვდომია მხოლოდ მცირე რაოდენობით რნმ.გლიკოგენის, როგორც გადამტანის დამატება რნმ-ის გამოყოფის დროს ხელს უწყობს მცირე ნიმუშების მოსავლიანობის გაზრდას.ტრიზოლთან ერთად შეიძლება დაემატოს RNase თავისუფალი გლიკოგენი.გლიკოგენი წყალში ხსნადია და შეიძლება დარჩეს წყლის ფაზაში რნმ-თან ერთად, რათა დაეხმაროს შემდგომ ნალექს.RNase-ის თავისუფალი გლიკოგენის რეკომენდებული კონცენტრაცია არის 250მკგ/მლ 50მგ-ზე ნაკლები ქსოვილის ან 106 კულტივირებული უჯრედისთვის.

აცეტილირებული BSA-ს დამატებით ტრანსკრიფციის რეაქციებში SuperScriptⅡ-ის გამოყენებით შეიძლება გაზარდოს მგრძნობელობა, ხოლო რნმ-ის მცირე რაოდენობით, SuperScriptⅡ-ის რაოდენობის შემცირება და 40 ერთეული RnaseOut ნუკლეაზას ინჰიბიტორის დამატება შეუძლია გააუმჯობესოს გამოვლენის დონე.თუ გლიკოგენი გამოიყენება რნმ-ის გამოყოფისას, BSA ან RNase ინჰიბიტორების დამატება ტრანსკრიპციის რეაქციების შებრუნებისთვის კვლავ რეკომენდებულია SuperScriptⅡ-ის გამოყენებით.

Ⅱ. RT-PCR-ის სპეციფიკის გაზრდა

1. cNDA სინთეზი:

სამი განსხვავებული მეთოდი შეიძლება გამოყენებულ იქნას პირველი ჯაჭვის cDNA სინთეზის დასაწყებად და თითოეული მეთოდის შედარებითი სპეციფიკა გავლენას ახდენს სინთეზირებული cDNA-ს რაოდენობასა და ტიპზე.

შემთხვევითი პრაიმერის მეთოდი სამი მეთოდიდან ყველაზე ნაკლებად სპეციფიკურია.პრაიმერები იკვრება მრავალ ადგილას ტრანსკრიპტის მანძილზე მოკლე, ნაწილობრივი სიგრძის cDNA-ს შესაქმნელად.ეს მეთოდი ხშირად გამოიყენება 5' ტერმინალური თანმიმდევრობების და cDNA-ს მისაღებად რნმ-ის შაბლონებიდან მეორადი სტრუქტურული რეგიონებით ან ტერმინალური უბნებით, რომლებზეც საპირისპირო ტრანსკრიპტაზას არ შეუძლია რეპლიკაცია.ყველაზე გრძელი cDNA-ს მისაღებად, პრაიმერების და რნმ-ის თანაფარდობა რნმ-ის თითოეულ ნიმუშში ემპირიულად უნდა განისაზღვროს.შემთხვევითი პრაიმერების საწყისი კონცენტრაცია მერყეობს 50-დან 250 ნგ-მდე 20 μl რეაქციის სისტემაზე.იმის გამო, რომ cDNA, რომელიც სინთეზირებულია მთლიანი რნმ-დან შემთხვევითი პრაიმერების გამოყენებით, ძირითადად რიბოსომური რნმ-ია, პოლი(A)+რნმ ძირითადად შეირჩევა შაბლონად.

ოლიგო(dT) დაწყება უფრო სპეციფიკურია, ვიდრე შემთხვევითი პრაიმერები.ის ჰიბრიდირებულია პოლი(A) კუდთან, რომელიც გვხვდება mRNA-ს 3' ბოლოს ევკარიოტულ უჯრედებში.იმის გამო, რომ პოლი(A)+რნმ არის მთლიანი რნმ-ის დაახლოებით 1%-დან 2%-მდე, cDNA-ს რაოდენობა და სირთულე გაცილებით ნაკლებია, ვიდრე შემთხვევითი პრაიმერების გამოყენების შემთხვევაში.მისი მაღალი სპეციფიკის გამო, ოლიგო(dT) ზოგადად არ საჭიროებს ოპტიმიზაციას რნმ-ის პრაიმერის თანაფარდობისთვის და პოლი(A)+ შერჩევისთვის.რეკომენდირებულია 0,5მკგ ოლიგო(dT) გამოყენება 20მკლ რეაქციის სისტემაზე.oligo(dT)12-18 შესაფერისია RT-PCR უმეტესობისთვის.ThermoScript RT-PCR სისტემა უზრუნველყოფს oligo(dT)20-ს კარგი თერმული სტაბილურობის გამო და შესაფერისია უფრო მაღალი ტემპერატურის შესანარჩუნებლად.

გენის სპეციფიკური პრაიმერები (GSP) არის საუკეთესო სპეციფიკური პრაიმერები საპირისპირო ტრანსკრიფციის საფეხურისთვის.GSP არის ანტიმგრძნობიარე ოლიგონუკლეოზიდი, რომელსაც შეუძლია სპეციფიურად ჰიბრიდიზაცია მოახდინოს რნმ-ის დანიშნულების თანმიმდევრობებთან, ვიდრე ყველა Rnas-ის ანეილირება, როგორიცაა შემთხვევითი პრაიმერები ან ოლიგო(dT).წესები, რომლებიც გამოიყენება PCR პრაიმერების დიზაინისთვის, ასევე ვრცელდება GSP-ის საპირისპირო ტრანსკრიფციის რეაქციის დიზაინზე.GSP შეიძლება იყოს იგივე თანმიმდევრობა, როგორც გამაძლიერებელი პრაიმერი, რომელიც ანელებულია mRNA3'-ის ბოლოს, ან GSP შეიძლება დაპროექტებული იყოს ქვემო დინებაში, საპირისპირო გამაძლიერებელი პრაიმერით.ზოგიერთი გაძლიერებული ობიექტისთვის აუცილებელია ერთზე მეტი ანტისენსიური პრაიმერის დაპროექტება წარმატებული RT-PCR-ისთვის, რადგან სამიზნე რნმ-ის მეორადი სტრუქტურამ შეიძლება ხელი შეუშალოს პრაიმერის შეკავშირებას.შემოთავაზებულია გამოიყენოს 1pmol ანტისენსიური GSP პირველი ჯაჭვის სინთეზის რეაქციის სისტემაში 20 μl.

2. გაზარდეთ საპირისპირო ტრანსკრიფციის სითბოს შენარჩუნების ტემპერატურა:

GSP სპეციფიურობის სრული სარგებლობისთვის უნდა იქნას გამოყენებული მაღალი თერმული სტაბილურობის მქონე საპირისპირო ტრანსკრიპტაზა.სითბოს მდგრადი საპირისპირო ტრანსკრიპტაზა შეიძლება იზოლირებული იყოს მაღალ ტემპერატურაზე რეაქციის სიმკაცრის გაზრდის მიზნით.მაგალითად, თუ GSP ადუღდება 55°C-ზე, მაშინ GSP-ის სპეციფიკა სრულად არ იქნება გამოყენებული, თუ საპირისპირო ტრანსკრიფცია შესრულებულია 37°C ტემპერატურაზე დაბალი სიმკაცრით AMV ან M-MLV გამოყენებით.თუმცა, SuperScripⅡ და ThermoScript-ს შეუძლიათ რეაგირება 50℃ ან უფრო მაღალ ტემპერატურაზე, რაც გამორიცხავს დაბალ ტემპერატურაზე წარმოებულ არასპეციფიკურ პროდუქტებს.მაქსიმალური სპეციფიკისთვის, რნმ/პრაიმერის ნარევი შეიძლება გადავიდეს პირდაპირ 65℃ დენატურაციის ტემპერატურიდან საპირისპირო ტრანსკრიპციის შენარჩუნების ტემპერატურაზე წინასწარ გახურებული 2 x რეაქციის ნარევის დამატებით (cDNA სინთეზის თერმული დაწყება).ეს ხელს უშლის ბაზის დაწყვილებას მოლეკულებს შორის დაბალ ტემპერატურაზე.PCR ინსტრუმენტის გამოყენება ამარტივებს RT-PCR-სთვის საჭირო ტემპერატურის მრავალ ცვლილებას.

3. შეამცირეთ გენომიური დნმ-ის დაბინძურება:

RT-PCR-ის ერთ-ერთი პოტენციური სირთულე არის ის, რომ რნმ აბინძურებს გენომიურ დნმ-ს.უკეთესი რნმ-ის გამოყოფის მეთოდების გამოყენება, როგორიცაა ტრიზოლის რეაგენტი, ამცირებს გენომიური დნმ-ის დაბინძურებას რნმ-ის პრეპარატებში.გენომიური დნმ-ისგან წარმოებული პროდუქტების თავიდან ასაცილებლად, რნმ შეიძლება დამუშავდეს ამპლიფიკაციის ხარისხის DnasⅠ-ით დაბინძურებული დნმ-ის მოსაშორებლად საპირისპირო ტრანსკრიფციამდე.ნიმუშები ინახება 65℃-ზე 2.0mM EDTA-ში 10 წუთის განმავლობაში DNaseⅠ მონელების შესაწყვეტად.EDTA აკავებს მაგნიუმის იონებს, რათა თავიდან აიცილოს მაგნიუმის იონზე დამოკიდებული რნმ-ის ჰიდროლიზი, რომელიც ხდება მაღალ ტემპერატურაზე.

გაძლიერებული cDNA გენომის დნმ-ის ამპლიფიკაციის პროდუქტისგან განცალკევების მიზნით, შეიძლება შეიქმნას პრაიმერები, რომლებიც განცალკევებულია გამოყოფილი ეგზონით.cDNA-დან მიღებული PCR პროდუქტები უფრო მოკლე იქნება, ვიდრე დაბინძურებული გენომიური დნმ-ისგან მიღებული პროდუქტები.კონტროლირებადი ექსპერიმენტი საპირისპირო ტრანსკრიფციის გარეშე ასევე ტარდება რნმ-ის თითოეულ შაბლონზე, რათა დადგინდეს, არის თუ არა მოცემული ფრაგმენტი გენომიური დნმ-დან ან cDNA-დან.საპირისპირო ტრანსკრიფციის არარსებობის შემთხვევაში მიღებული PCR პროდუქტები მიღებულია გენომიდან.

დაკავშირებული პროდუქტი

RT-PCR მარტივია^ᵀᴹმე (ერთი ნაბიჯი)

-ერთსაფეხურიანი ნაკრები იძლევა საპირისპირო ტრანსკრიფციის და PCR-ის განხორციელებას იმავე მილში.საჭიროა მხოლოდ შაბლონის რნმ-ის, სპეციფიკური PCR პრაიმერების და RNase-ის გარეშე ddH-ის დამატება.₂O.

-რნმ-ის რაოდენობრივი ანალიზი რეალურ დროში შეიძლება ჩატარდეს სწრაფად და ზუსტად.

- ნაკრები იყენებს უნიკალურ Foregene-ის საპირისპირო ტრანსკრიფციის რეაგენტს და Foregene HotStar Taq დნმ პოლიმერაზას კომბინირებულ უნიკალურ რეაქციის სისტემასთან, რათა ეფექტურად გააუმჯობესოს რეაქციის გაძლიერების ეფექტურობა და სპეციფიკა.

- ოპტიმიზებული რეაქციის სისტემა ხდის რეაქციას უფრო მაღალი აღმოჩენის მგრძნობელობის, ძლიერი თერმული სტაბილურობისა და უკეთესი ტოლერანტობის.

RT Easy II (GDNase-ით) ძირითადი პრემიქსი პირველი ჯაჭვის CDNA სინთეზისთვის რეალურ დროში PCR GDNase-ით

-გდნმ-ის ამოღების ეფექტური უნარი, რომელსაც შეუძლია შაბლონში გდნმ-ის ამოღება 2 წუთში.

- ეფექტური საპირისპირო ტრანსკრიფციის სისტემა, პირველი ჯაჭვის cDNA-ს სინთეზის დასრულებას მხოლოდ 15 წუთი სჭირდება.

-კომპლექსური შაბლონები: შაბლონები მაღალი GC შემცველობით და რთული მეორადი სტრუქტურით, ასევე შეიძლება შეიცვალოს მაღალი ეფექტურობით.

-მაღალი მგრძნობელობის საპირისპირო ტრანსკრიფციის სისტემა, pg დონის შაბლონებს ასევე შეუძლიათ მიიღონ მაღალი ხარისხის cDNA.

- საპირისპირო ტრანსკრიფციის სისტემას აქვს მაღალი თერმული სტაბილურობა, რეაქციის ოპტიმალური ტემპერატურაა 42℃ და მას ჯერ კიდევ აქვს კარგი საპირისპირო ტრანსკრიფციის შესრულება 50℃-ზე.