რჩევები წებოს აღდგენის გასაუმჯობესებლად

1. გაზარდეთ ნიმუშის დატვირთვა ელექტროფორეზის დროს.

2. გამოიყენეთ ახლად მომზადებული ელექტროფორეზის ბუფერი.

3. წებოს დაჭრისას შეეცადეთ დაჭრათ მხოლოდ წებო ზოლებით, რათა შეამციროთ წებოს ჭრის მოცულობა: არ გჭირდებათ წებო მცირე დანიშნულების ფრაგმენტებით, წინააღმდეგ შემთხვევაში ეს იმოქმედებს აღდგენის სიჩქარეზე.

4. ორი ან მეტი ცალი წებოს დნობის შემდეგ გამოიყენეთ ტუბი რაც არ უნდა დიდი იყოს მოცულობა და გადაიტანეთ იმავე სვეტში.

5. სოლში დამატებული ხსნარი შეიძლება იყოს ცოტა მეტი, რაც უფრო ხელს უწყობს დნმ-ის მემბრანასთან შეკავშირებას, მაგრამ ზოგადად არ აღემატება 750 მულტს.

6. გელის აღდგენის გასაღები არის დნმ-ის მიბმა სვეტთან მარილის კონცენტრაციის, მჟავიანობის (დამუხტვის) და ხსნარის ჰიდროფობიურობის მეშვეობით სვეტში.ამიტომ, თუ ელექტროფორეზის ბუფერის pH ძალიან მაღალია, ხსნარს შეიძლება დაემატოს 10 მულტი (pH 5.0, 3მოლ/ლ NaAC);მემბრანაზე დნმ-ის მოლეკულების უკეთ გადასაჭრელად, წებოს დაშლის შემდეგ შეიძლება დაემატოს 30% იზოპროპანოლი სითხეში გაცხელებისთვის.

7. ელუენტის დამატებამდე, დატოვეთ სვეტი ოთახის ტემპერატურაზე რამდენიმე წუთის განმავლობაში (დაახლოებით 10 წუთი), რათა სრულად აორთქლდეს ეთანოლი.

8. და ბოლოს, დაამატეთ ნაკლები ელუენტი, რათა შემცირდეს აღდგენის მოცულობა.საერთოდ, გამორეცხვისთვის გამოიყენება 30-50მკლ ელუენტი (არც ისე ცოტა, წინააღმდეგ შემთხვევაში ვერ დაასველებს მემბრანას, რაც არ არის გამორეცხვისთვის ხელსაყრელი);ელუციის წვეთები მემბრანის ცენტრშია, რათა სრულად გამოირეცხოს მემბრანასთან დაკავშირებული დნმ.

9. ელუენტის დამატების შემდეგ შეიძლება 5 წუთის განმავლობაში წყლის აბაზანაში 55 გრადუსზე მოთავსება ან 10 წუთზე მეტ ხანს 50 გრადუსზე წყლის აბაზანაში მოთავსება, ან 4 გრადუსზე პარაფილმის დალუქვა ღამით და შემდეგ ცენტრიფუგირება აღსადგენად მეორე დღეს, ეფექტი კარგია.

10. დაამატეთ ცენტრიფუგირებული ელუატი ადსორბციის სვეტში და კვლავ ცენტრიფუგა.

PCR პროდუქტის აღდგენის დეტალური მეთოდები და პროცედურები

1. ჩვეულებრივი რეზინის გადამუშავება

თუ გსურთ წებოს აღდგენა, უმჯობესია გამოიყენოთ ნაკრები, რომელიც მოსახერხებელია და აღდგენის ოდნავ მაღალი მაჩვენებელი აქვს.თუ ნამდვილად გჭირდებათ მისი ხელით აღდგენა, წებოს დაჭრის შემდეგ შეგიძლიათ დაამატოთ TE-ის 3-ჯერ მოცულობა.წყლის აბაზანაში დნობის შემდეგ ფენოლს, ფენოლს/ქლოროფორმს სუფთად იღებენ და ეთანოლს აყრიან.Ის არის.

2. დნმ-ის აღდგენა დაბალი დნობის წერტილის გელებიდან

დნმ-ის ფრაგმენტების გაწმენდა დაამატეთ TE (10 მმოლ/ლ Tris-HCl pH8.0, 0.1 მმოლ/ლ EDTA) გელის მოცულობის ტოლი და მოათავსეთ 65°C წყლის აბაზანაში 5 წუთის განმავლობაში, რომ გელი მთლიანად დაითხოვოს.

მას შემდეგ, რაც იგი ოთახის ტემპერატურამდე მიიყვანა, დაუმატეს თანაბარი რაოდენობის ფენოლი (TE-ით გაჯერებული, TE დალუქული იყო ზედა ფენაში, ხოლო ფენოლის ქვედა ფენა ამოღებულ იქნა) და ნარევი ნაზად შეურიეს (არ საჭიროებს შერევას) და ცენტრიფუგირებულ იქნა 12000 rpm-ზე 3 წუთის განმავლობაში.გაიმეორეთ 1-2 ჯერ.

აიღეთ სუპერნატანი, დაამატეთ 0,1 მოცულობა 3 მოლ/ლ ნატრიუმის აცეტატი (pH 5,2) და 2,5-ჯერ მეტი აბსოლუტური ეთანოლის მოცულობა ეთანოლის დალექვის მიზნით.გასუფთავებული დნმ იხსნება TE-ს შესაბამისი რაოდენობით, გაზომეთ შინაარსი და მოამზადეთ გამოსაყენებლად (ის შეიძლება გამოყენებულ იქნას სამიზნე გენის სტრუქტურის ანალიზისთვის, ზონდის მოსამზადებლად და ა.შ.).

3. PCR აღდგენა კარგი ამპლიფიკაციის სპეციფიკით

თუ PCR ამპლიფიკაციის სპეციფიკა კარგია, ეს არის მხოლოდ PCR პროდუქტის მარტივი გაწმენდა და აღდგენა.შეგიძლიათ დაამატოთ 50 მგ/მლ პროტეინაზა K PCR პროდუქტს, 37 გრადუსზე 1 სთ-ის განმავლობაში, ამოიღოთ ერთხელ ფენოლით/ქლოროფორმით, ამოიღოთ ერთხელ ქლოროფორმით და დაამატეთ 0,1 მოცულობის სუპერნატანტი.ნატრიუმის აცეტატი აღდგენილი იქნა აბსოლუტური ეთანოლის 2.5 მოცულობით ნალექით.

Მსგავსი პროდუქტები:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/