A260/A230-ის დაბალი თანაფარდობა ჩვეულებრივ გამოწვეულია მინარევებით მაქსიმალური შთანთქმის ტალღის სიგრძით 230 ნმ.ვნახოთ, რას მოიცავს ეს მინარევები:

• საერთო დამაბინძურებლები	შთანთქმის ტალღის სიგრძე	თანაფარდობის ეფექტი
  პროტეინი	~ 230 ნმ და 280 ნმ	ა-ს ერთდროული შემცირება260/A 280და ა260/A 280კოეფიციენტები
  გუანიდინის მარილი	220-240 ნმ	შეამცირეთ A260/A 280თანაფარდობა
  ფენოლი	~ 270 ნმ	-
  ტრიზოლი	~ 230 ნმ და 270 ნმ	შეამცირეთ A260/A 280თანაფარდობა
  EDTA	~ 230 ნმ	შეამცირეთ A260/A 280თანაფარდობა
  ეთანოლი	230-240 ნმ	შეამცირეთ A260/A 280თანაფარდობა

 
 
 
საერთო დამაბინძურებლების შთანთქმის ტალღის სიგრძე და კონტრასტული მნიშვნელობა

Pროტეინით დაბინძურება
ცილების დაბინძურება შეიძლება ჩაითვალოს ყველაზე გავრცელებულ დაბინძურებად ნუკლეინის მჟავას მოპოვების პროცესში.ცილა არსებობს ზედა წყალსა და ქვედა ფაზას შორისორგანულიფაზა .დაბინძურება შეამცირებს A260/A280 და A260/A230 თანაფარდობას ერთდროულად, ხოლო A260/A230 თანაფარდობა უფრო აშკარად შეიცვლება ვიდრე A260/A280 თანაფარდობა.
შემდგომშისაპირისპირო ტრანსკრიფციაor qPCR რეაქციები, ცილის ნარჩენებს შეუძლიათ დათრგუნონ ან ხელი შეუშალონ ფერმენტის ფუნქციას.პროტეინის დაბინძურების თავიდან აცილების საუკეთესო საშუალებაა სუპერნატანტის ასპირაციისას პრინციპის გათვალისწინება: „უფრო ნაკლები, ვიდრე მეტი, მცირე რაოდენობით ბევრჯერ“.

2. გუანიდინით დაბინძურება
ჰიდროქლორიდს (GuHCl) და გუანიდინის თიოციანატს (GTC) აქვთ ცილების დენატურაციის ეფექტი, რომელსაც შეუძლია სწრაფად გაანადგუროს უჯრედის მემბრანები ნუკლეინის მჟავას ექსტრაქციის პროცესში, რაც იწვევს ცილების დენატურაციას და ნალექს.GuHCl-ისა და GTC-ის შთანთქმის ტალღის სიგრძე 220-240 ნმ-ს შორისაა დანარჩენი გუანიდინის მარილი შეამცირებს A260/A230 თანაფარდობას.მიუხედავად იმისა, რომ ნარჩენი გუანიდინის მარილი შეამცირებს თანაფარდობას,ზემოქმედება ქვედა დინების ექსპერიმენტებზე ფაქტობრივად უმნიშვნელოა.

3. ტრიზოლის დაბინძურება
ტრიზოლის მთავარი კომპონენტია ფენოლი.ფენოლის მთავარი ფუნქციაა უჯრედების ლიზირება და უჯრედებში ცილების და ნუკლეინის მჟავების ნივთიერებების გამოყოფა.მიუხედავად იმისა, რომ ფენოლს შეუძლია ცილების ეფექტურად დენატაცია, მას არ შეუძლია მთლიანად დათრგუნოს RNase აქტივობა.ამიტომ, ტრიზოლს ემატება 8-ჰიდროქსიქინოლინი, გუანიდინის იზოთიოციანატი, β-მერკაპტოეთანოლი და ა.შ., რათა დათრგუნონ ენდოგენური და ეგზოგენური RNase.
ფიჭური რნმ-ის ექსტრაქციისას ტრიზოლს შეუძლია სწრაფად მოახდინოს უჯრედების ლიზინება და უჯრედებიდან გამოთავისუფლებული ნუკლეაზას დათრგუნვა, ხოლო ნარჩენი ტრიზოლი მნიშვნელოვნად შეამცირებს A260/A230 თანაფარდობას.
დამუშავების მეთოდი: ცენტრიფუგის დროს უნდა აღინიშნოს, რომ ტრიზოლში არსებული ფენოლი ადვილად ხსნადია წყლის ფაზაში 4° და ოთახის ტემპერატურის პირობებში.

4. ეთანოლის ნარჩენი
ეთანოლი გამოიყენება საბოლოო პროცესში დნმ-ის დალექვისას მარილის იონების დაშლისას, რომლებიც შეიძლება იყოს დაკავშირებული დნმ-თან.შთანთქმის ტალღის სიგრძე ყველაზე მაღალიაშთანთქმის პიკიეთანოლი ასევე არის 230-240 ნმ, რაცასევე შეამცირებს A260/A230 თანაფარდობას.
ეთანოლის ნარჩენების თავიდან აცილების მეთოდი შეიძლება განმეორდეს ორჯერ საბოლოო გამორეცხვის დროს, აფეთქებითგამწოვიორი წუთის განმავლობაში, რათა ეთანოლი სრულად აორთქლდეს, სანამ დაამატებთ ბუფერს გამორეცხვისთვის.
თუმცა, უნდა იყოს ცნობილი, რომ თანაფარდობა მხოლოდ რნმ-ის ხარისხის შეფასების მაჩვენებელია.თუ ზემოაღნიშნული ოპერაციები მკაცრად რეგულირდება, თანაფარდობასა და სტანდარტულ დიაპაზონს შორის გადახრა დიდ გავლენას არ მოახდენს ქვედა დინების ექსპერიმენტებზე.
Მსგავსი პროდუქტები:
ცხოველის მთლიანი რნმ-ის იზოლაციის ნაკრები
მცენარეთა მთლიანი რნმ-ის იზოლაციის ნაკრები
უჯრედის მთლიანი რნმ-ის იზოლაციის ნაკრები
მცენარეთა მთლიანი რნმ-ის იზოლაციის ნაკრები Plus