მცენარეთა ტოტალური რნმ-ის საიზოლაციო ნაკრები სულ რნმ-ის გამწმენდის ნაკრები მცენარისთვის დაბალი პოლისაქარიდებისა და პოლიფენოლებისთვის
სპეციფიკაციები
50 მოსამზადებელი, 200 მოსამზადებელი
ნაკრები იყენებს Foregene-ის მიერ შემუშავებულ სპინის სვეტს და ფორმულას, რომელსაც შეუძლია ეფექტურად ამოიღოს მაღალი სისუფთავის და მაღალი ხარისხის მთლიანი რნმ მცენარეთა სხვადასხვა ქსოვილებიდან დაბალი პოლისაქარიდების და პოლიფენოლების შემცველობით.მცენარის ნიმუშებისთვის მაღალი პოლისაქარიდების ან პოლიფენოლების შემცველობით, რეკომენდებულია მცენარეთა მთლიანი რნმ-ის იზოლაციის პლუს ნაკრების გამოყენება რნმ-ის ექსტრაქციის უკეთესი შედეგების მისაღებად.ნაკრები უზრუნველყოფს დნმ-ის გამწმენდ სვეტს, რომელსაც შეუძლია ადვილად ამოიღოს გენომიური დნმ სუპერნატანტიდან და ქსოვილის ლიზატიდან.მხოლოდ რნმ-ის სვეტს შეუძლია ეფექტურად დააკავშიროს რნმ.კომპლექტს შეუძლია ერთდროულად დიდი რაოდენობით ნიმუშების დამუშავება.
მთელი სისტემა არ შეიცავს RNase-ს, ამიტომ გაწმენდილი რნმ არ დაიშლება.ბუფერს PRW1 და ბუფერს PRW2 შეუძლია უზრუნველყოს, რომ მიღებული რნმ არ იყოს დაბინძურებული ცილებით, დნმ-ით, იონებით და ორგანული ნაერთებით.
ნაკრების კომპონენტები
| ბუფერი PSL1, ბუფერი PS, ბუფერი PSL2 |
| ბუფერი PRW1, ბუფერი PRW2 |
| RNase-ის გარეშე ddH2O, დნმ-ის გამწმენდი სვეტი |
| რნმ-მხოლოდ სვეტი |
| ინსტრუქციები |
მახასიათებლები და უპირატესობები
■ მუშაობა ოთახის ტემპერატურაზე (15-25℃) მთელი პროცესის განმავლობაში, ყინულის აბაზანისა და დაბალი ტემპერატურის ცენტრიფუგაციის გარეშე.
■ სრული ნაკრები RNase-ის გარეშე, არ არის საჭირო რნმ-ის დეგრადაციის შესახებ ფიქრი.
■ დნმ-ის გამწმენდი სვეტი სპეციალურად უკავშირდება დნმ-ს, რათა კომპლექტმა შეძლოს გენომიური დნმ-ის დაბინძურების მოცილება DNase-ის დამატების გარეშე.
■ რნმ-ის მაღალი გამოსავლიანობა: მხოლოდ რნმ-ის სვეტი და უნიკალური ფორმულა ეფექტურად წმენდს რნმ-ს.
■ სწრაფი სიჩქარე: მარტივი მუშაობა და შეიძლება დასრულდეს 30 წუთში.
■ უსაფრთხოება: არ არის საჭირო ორგანული რეაქტივი.
■ მაღალი ხარისხი: გაწმენდილი რნმ-ის ფრაგმენტები არის მაღალი სისუფთავის, პროტეინისა და სხვა მინარევებისაგან თავისუფალი და შეუძლია შეასრულოს სხვადასხვა ექსპერიმენტული გამოყენება.
ნაკრების აპლიკაცია
იგი განკუთვნილია მთლიანი რნმ-ის მოპოვებისა და გასაწმენდად ახალი ან გაყინული მცენარის ქსოვილის ნიმუშებიდან (განსაკუთრებით მცენარის ახალი ფოთლის ქსოვილიდან) დაბალი პოლისაქარიდისა და პოლიფენოლის შემცველობით.
სამუშაო ნაკადი
დიაგრამა
Plant Total RNA Isolation Kit Plus-მა დაამუშავა 50მგ პოლისაქარიდების და პოლიფენოლების ახალი ფოთლები და 5% გაწმენდილი რნმ გამოიცადა ელექტროფორეზით.
1: ბანანი
2: გინკო
3: ბამბა
4: ბროწეული
შენახვა და შენახვის ვადა
ნაკრების შენახვა შესაძლებელია 12 თვის განმავლობაში ოთახის ტემპერატურაზე (15–25 ℃) მშრალ გარემოში და 2–8 ℃ უფრო დიდხანს (24 თვე).
ბუფერი PSL1 შეიძლება ინახებოდეს 4 ℃ ტემპერატურაზე 1 თვის განმავლობაში 2-ჰიდროქსი-1-ეთანეთიოლის დამატების შემდეგ (სურვილისამებრ).
პრობლემის ანალიზის გზამკვლევი
ქვემოთ მოცემულია იმ პრობლემების ანალიზი, რომლებიც შეიძლება შეგხვდეთმცენარე სულRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
დატრიალების სვეტი ჩაკეტილია
სპინის სვეტის ბლოკირება გამოიწვევს რნმ-ის გამოსავლიანობის შემცირებას ან თუნდაც ვერ გაწმენდას რნმ-ის მისაღებად, ხოლო მიღებული რნმ-ის ხარისხი დაბალი იქნება.
საერთო მიზეზების ანალიზი:
1. ნიმუში მთლიანად არ არის გატეხილი.
ნიმუშის არასრულმა ფრაგმენტაციამ შეიძლება დაბლოკოს დნმ-ის გამწმენდი სვეტი, რაც ასევე შეიძლება გავლენა იქონიოს რნმ-ის გამომუშავებაზე და ხარისხზე.ჩვენ გირჩევთ, რომ ნიმუშების ფრაგმენტაციის შესრულებისას, სწრაფად დაფქვათ საკმარისი რაოდენობით თხევადი აზოტი, რათა მაქსიმალურად დაიშალოს ქსოვილები, როგორიცაა უჯრედის კედლები და ნიმუშების უჯრედული გარსი.პოლიფენოლ პოლისაქარიდების მცენარეული ნიმუშებისთვის, ჩვენ გირჩევთ გამოიყენოთ Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
2. ასპირაცია დნმ-ის გამწმენდი სვეტის იზოლირებული ზენატანი, ასპირაცია შესაძლებელია უჯრედის ნარჩენების მარცვლები.
ასპირირებულ უჯრედის ნამსხვრევების მარცვლებს შეუძლიათ დაბლოკოს მხოლოდ რნმ-ის სვეტი რნმ-ის ადსორბციის პროცედურების დროს (იხილეთ პროცედურის ნაბიჯი 5, პოლისაქარიდული პოლიფენოლის პროცედურის ნაბიჯი 6).ჩვენ გირჩევთ, რომ ფრთხილად იყოთ ამ სუპერნატანტის ასპირაციისას, რათა თავიდან აიცილოთ უჯრედული ნარჩენების ასპირაცია.
3. ნიმუშის საწყისი რაოდენობა ძალიან დიდია.
ნიმუშის გადაჭარბებული გამოყენება გამოიწვევს ნიმუშის არასრულ ფრაგმენტაციას ან უჯრედების არასრულ ლიზას ბუფერული PRL1-ით ან ბუფერული PSL1-ით, რაც გამოიწვევს გამწმენდი ოპერაციების ჩაკეტილ გამწმენდ სვეტს.მცენარეთა ტოტალური რნმ-ის იზოლაციის კომპლექტს აქვს საწყისი მაქსიმუმი 50 მგ საოპერაციო ნიმუშის ერთჯერადი გაწმენდისთვის.პოლიფენოლ პოლისაქარიდების მცენარეული ნიმუშებისთვის, ჩვენ გირჩევთ, სცადოთ მცენარეთა ტოტალური რნმ-ის იზოლაციის ნაკრები პლუსი.
4. ცენტრიფუგის ტემპერატურა ძალიან დაბალია.
მთლიანი რნმ-ის იზოლაცია და გაწმენდა, გარდა ნიმუშის ქსოვილის თხევადი აზოტის მოშლისა, ყველა ნაბიჯი შესრულებულია ოთახის ტემპერატურაზე (20-25 °C).ზოგიერთ დაბალი ტემპერატურის ცენტრიფუგას აქვს 20 °C-ზე დაბალი ტემპერატურა, რამაც შეიძლება გამოიწვიოს დნმ-ის გამწმენდი სვეტის და/ან მხოლოდ რნმ-ის სვეტის ბლოკირება.თუ ეს მოხდება, დააყენეთ ცენტრიფუგის ტემპერატურა 20-25 °C-მდე და წინასწარ გაათბეთ ლიზისური ნარევი და/ან ეთანოლის გამოყოფის სუპერნატანტის დამატება 37 °C-მდე.
არ არის მოპოვებული რნმ ან რნმ-ის გამოსავალი დაბალია
როგორც წესი, არსებობს მრავალი ფაქტორი, რომელიც გავლენას ახდენს აღდგენის ეფექტურობაზე, როგორიცაა: ნიმუშის რნმ-ის შემცველობა, ოპერაციის მეთოდი, გამორეცხვის მოცულობა და ა.შ.
საერთო მიზეზების ანალიზი შემდეგნაირად:
1.ოპერაციის დროს ჩატარდა ყინულის აბაზანა ან დაბალი ტემპერატურის (4°C) ცენტრიფუგაცია.
შემოთავაზება: მთელი პროცესის განმავლობაში იმუშავეთ ოთახის ტემპერატურაზე (15-25°C), არ გააკეთოთ ყინულის აბაზანა და დაბალი ტემპერატურის ცენტრიფუგაცია.
2.რნმ დეგრადირებულია ნიმუშის არასათანადო შენარჩუნების ან ნიმუშის გრძელვადიანი შენარჩუნების გამო.
რეკომენდაცია: ახლად შეგროვებული ნიმუშები სწრაფად უნდა გაიყინოს თხევად აზოტში და შემდეგ ინახებოდეს -80°C-ზე დიდი ხნის განმავლობაში, თავიდან აიცილოთ ნიმუშების განმეორებითი გაყინვა და გალღობა;ან დაუყოვნებლივ დაასველეთ ნიმუშები რნმ-ის სტაბილიზატორის RNA ხსნარში (ცხოველის ნიმუშები).
3.ნიმუშის არასაკმარისი ფრაგმენტაცია და ლიზისი იწვევს გამწმენდი სვეტის ბლოკირებას.
წინადადება: ქსოვილის დაფქვისას დარწმუნდით, რომ ქსოვილი საკმარისად არის დაფქული და სწრაფად გადაიტანეთ იგი წინასწარ მომზადებულ ბუფერ PSL1-ში (დაადასტურეთ, რომ დამატებულია β-ME-ს სწორი პროპორცია, იხილეთ პროცედურის ნაბიჯი 1).
4.ელუენტი დამატებულია არასწორად.
შემოთავაზება: დარწმუნდით, რომ RNase-ის გარეშე ddH2O წვეთოვანია გამწმენდი სვეტის მემბრანის შუაში.
5. აბსოლუტური ეთანოლის სწორი მოცულობა არ დაემატა ბუფერ PSL2-ს ან ბუფერს PRW2-ს.
წინადადება: გთხოვთ, მიჰყევით ინსტრუქციას, დაამატეთ აბსოლუტური ეთანოლის სწორი მოცულობა ბუფერ PSL2-სა და Buffer PRW2-ში და კარგად აურიეთ ნაკრების გამოყენებამდე.
6. ქსოვილის ნიმუშის რაოდენობა შეუსაბამოა.
შემოთავაზება: გამოიყენეთ 50 მგ ქსოვილი 500 μl ბუფერ PSL1-ზე.ძალიან ბევრი ქსოვილის გამოყენება შეამცირებს მოპოვებული რნმ-ის რაოდენობას და შედეგად მიღებული რნმ-ის სისუფთავე ასევე შემცირდება.ჩვენ მკაცრად გირჩევთ, რომ ნიმუშის საწყისი დოზა არ უნდა აღემატებოდეს 50 მგ-ს რნმ-ის ექსტრაქციის ოპერაციაზე.
7. გამორეცხვის შეუსაბამო მოცულობა ან არასრული ელუცია.
შემოთავაზება: გამწმენდი სვეტის ელუენტის მოცულობა არის 50-200 μl;თუ გამორეცხვის ეფექტი არ არის დამაკმაყოფილებელი, რეკომენდებულია დროის გახანგრძლივება ოთახის ტემპერატურაზე წინასწარ გახურებული RNase-ის გარეშე ddH-ის დამატების შემდეგ.2O, როგორიცაა 5-10 წთ.
8. გამწმენდ სვეტს აქვს ეთანოლის ნარჩენი ბუფერი PRW2-ით გარეცხვის შემდეგ.
წინადადება: თუ ცარიელი მილის ცენტრიფუგირება ხდება 1 წუთის განმავლობაში და ბუფერ PRW2-ში გარეცხვის შემდეგ ჯერ კიდევ რჩება ეთანოლი, შეგიძლიათ გაზარდოთ ცარიელი მილის ცენტრიფუგაციის დრო 2 წთ-მდე, ან განათავსოთ გამწმენდი სვეტი ოთახის ტემპერატურაზე 5 წუთის განმავლობაში, რათა სრულად მოიხსნას ნარჩენი ეთანოლი.
9. ნაკრები არასწორად იქნა გამოყენებული.
შემოთავაზება: პოლიფენოლური პოლისაქარიდების მცენარეული ნიმუშებისთვის, ჩვეულებრივი კომპლექტების გამოყენებით, როგორიცაა Plant Total RNA Isolation Kit, შეიძლება ვერ მივიღოთ იდეალური რნმ-ის ნიმუშები.ჩვენ გირჩევთ გამოიყენოთ Plant Total RNA IsolationKit Plus, რომელიც სპეციალურად შექმნილია პოლიფენოლური პოლისაქარიდის მცენარის ნიმუშებისთვის.სპეციალურად შემუშავებული ნაკრები პოლიფენოლისა და პოლისაქარიდის მცენარის ნიმუშებიდან რნმ-ის მოსაპოვებლად.
OD260/OD280 მნიშვნელობა დაბალია
რნმ-ის ელუცია ddH-ით2O და გამოიყენება სპექტროფოტომეტრის ჩვენებისთვის, იწვევს დაბალ OD260/OD280 მნიშვნელობებს.ჩვენ გირჩევთ გამოიყენოთ 10 მმ Tris-HCl, pH 7.5 (და არა RNase-ის თავისუფალი ddH2O რნმ-ის გამორეცხვა) შედარებით სწორი OD260/OD280 მნიშვნელობების მისაღებად, იხილეთ „რნმ-ის კონცენტრაციისა და გამწმენდის ანალიზი“ მე-19 გვერდზე.
გაწმენდილი რნმ იშლება
გასუფთავებული რნმ-ის ხარისხი დაკავშირებულია ისეთ ფაქტორებთან, როგორიცაა ნიმუშის შენარჩუნება, RNase დაბინძურება და მანიპულირება.
საერთო მიზეზების ანალიზი:
1. ქსოვილის ნიმუშები არ იყო შენახული დროულად შეგროვების შემდეგ.
რეკომენდაცია: თუ ქსოვილის ნიმუშები დროულად არ გამოიყენება შეგროვების შემდეგ, გთხოვთ, დაუყოვნებლივ შეინახოთ ისინი თხევად აზოტში დაბალ ტემპერატურაზე ან გადაიტანეთ -80°C-ზე ხანგრძლივი შენახვისთვის თხევად აზოტში სწრაფი გაყინვის შემდეგ, ან დაუყოვნებლივ ჩაეფლოთ რნმ-ის სტაბილიზატორის RNA ხსნარში (ცხოველის ნიმუშები).რნმ-ის ექსტრაქციისთვის შეეცადეთ გამოიყენოთ ახლად შეგროვებული ქსოვილის ნიმუშები.
2.ქსოვილის ნიმუშების განმეორებითი გაყინვა და დათბობა.
შემოთავაზება: ქსოვილის ნიმუშების შენახვისას უმჯობესია დაჭრათ ისინი შესანარჩუნებლად პატარა ნაჭრებად და გამოყენებისას მათი ნაწილი ამოიღოთ, რათა თავიდან აიცილოთ რნმ-ის დეგრადაცია, რომელიც გამოწვეულია ნიმუშების განმეორებითი გაყინვით და დნობით.
3.RNase შეყვანილია საოპერაციო ოთახში ან არ აცვიათ ერთჯერადი ხელთათმანები, ნიღბები და ა.შ.
შემოთავაზება: რნმ-ის ექსტრაქციის ექსპერიმენტები საუკეთესოდ ჩატარდება რნმ-ის ცალკეულ ოპერაციებში და ლაბორატორიული მაგიდა უნდა გაიწმინდოს ექსპერიმენტამდე, ხოლო ექსპერიმენტის დროს უნდა ატაროთ ერთჯერადი ხელთათმანები და ნიღბები, რათა თავიდან იქნას აცილებული რნმ-ის დეგრადაცია, რომელიც გამოწვეულია RNase-ს შეყვანით.
4. გამოყენებისას რეაგენტი დაბინძურებულია RNase-ით.
შემოთავაზება: ჩაანაცვლეთ მცენარეთა მთლიანი რნმ-ის ექსტრაქციის ნაკრების ახალი სერიით შესაბამისი ექსპერიმენტებისთვის.
5. ცენტრიფუგის მილები და პიპეტების წვერები, რომლებიც გამოიყენება რნმ-ით მანიპულირებისთვის, დაბინძურებულია RNase-ით.
შემოთავაზება: დარწმუნდით, რომ ცენტრიფუგის მილები, პიპეტების წვერები, პიპეტები და ა.შ., რომლებიც გამოიყენება რნმ-ის ექსტრაქციაში, არ შეიცავს RNase-ს.
ინსტრუქციის სახელმძღვანელოები:
