ბუკალური ნაცხი/FTA ბარათის დნმ-ის საიზოლაციო ნაკრები გენომიური დნმ-ის ამოღების ან გამწმენდი ნაკრები ბუკალური ნაცხიდან
ნაკრების აღწერა:
სწრაფად გაწმინდეთ მაღალი ხარისხის გენომიური დნმ ბუკალური ნაცხის/FTA ბარათის ნიმუშებიდან.
◮არ არის RNase დაბინძურება:ნაკრების მიერ მოწოდებული მხოლოდ დნმ-ის სვეტი შესაძლებელს ხდის რნმ-ის ამოღებას გენომიური დნმ-დან ექსპერიმენტის დროს RNase-ის დამატების გარეშე, რაც ხელს უშლის ლაბორატორიის დაბინძურებას ეგზოგენური RNase-ით.
◮სწრაფი სიჩქარე:ფორეგენის პროტეაზას აქვს უფრო მაღალი აქტივობა, ვიდრე მსგავსი პროტეაზები და სწრაფად ითვისებს ქსოვილის ნიმუშებს;ოპერაცია მარტივია და გენომიური დნმ-ის ექსტრაქციის ოპერაცია შეიძლება დასრულდეს 20-80 წუთში.
◮მოსახერხებელი:ცენტრიფუგაცია ტარდება ოთახის ტემპერატურაზე და არ არის საჭირო 4°C დაბალი ტემპერატურის ცენტრიფუგაცია ან დნმ-ის ეთანოლის დალექვა.
◮Უსაფრთხოება:არ არის საჭირო ორგანული რეაგენტის მოპოვება.
◮Მაღალი ხარისხი:ამოღებულ გენომურ დნმ-ს აქვს დიდი ფრაგმენტები, არ აქვს რნმ, არ არის RNase და უკიდურესად დაბალი იონების შემცველობა, რაც შეიძლება დააკმაყოფილოს სხვადასხვა ექსპერიმენტების მოთხოვნებს.
◮მიკრო-ელუციის სისტემა:მას შეუძლია გაზარდოს გენომიური დნმ-ის კონცენტრაცია, რაც მოსახერხებელია ქვედა დინების აღმოჩენისთვის ან ექსპერიმენტისთვის.
აღწერა
ეს ნაკრები უზრუნველყოფს ეფექტურ და სწრაფ მეთოდს მაღალი კონცენტრაციის გენომური დნმ-ის მისაღებად ბუკალური ნაცხიდან და FTA ბარათიდან (სისხლის ლაქები).ჩვენი კომპანიის გამოყენებით'უნიკალური დნმ მხოლოდ სილიციუმის მემბრანის სპინი სვეტი და ფორმულა, Foregene Protease-თან ერთად, მაღალი კონცენტრაციის, მაღალი ხარისხის გენომიური დნმ-ის ამოღება შესაძლებელია 80 წუთში.სპეციალურად შექმნილი მცირე გამწმენდი სვეტი აკავშირებს გენომურ დნმ-ს და დნმ შეიძლება გამოირეცხოს მცირე რაოდენობით (15μl) გამორეცხვის სისტემა მიღებული გენომის დნმ-ის კონცენტრაციის გასაზრდელად, რაც მოსახერხებელია ქვედა დინების აღმოჩენის ან ექსპერიმენტისთვის.კომპლექტს შეუძლია ერთდროულად დაამუშაოს ერთი ან მეტი ნიმუში და გაწმენდის პროცესი არ საჭიროებს ორგანული ნივთიერებების მოპოვებას, როგორიცაა ფენოლი, ქლოროფორმი და შრომატევადი იზოპროპანოლის ან ეთანოლის ნალექი, ხოლო ოპერაცია მარტივია და დაზოგავს დროს.
სპეციფიკაციები
50 მოსამზადებელი
ნაკრების კომპონენტები
| ბუფერი ST1 |
| ბუფერი ST2 |
| ხაზოვანი აკრილამიდი |
| ბუფერი PW |
| ბუფერი WB |
| ბუფერი EB |
| ფორეგენის პროტეაზა |
| დნმ-მხოლოდ სვეტი |
| ინსტრუქციები |
მახასიათებლები და უპირატესობები
-არ არის RNase დაბინძურება: ნაკრების მიერ მოწოდებული მხოლოდ დნმ-ის სვეტი შესაძლებელს ხდის რნმ-ის ამოღებას გენომიური დნმ-დან RNase-ის დამატების გარეშე ექსპერიმენტის დროს, თავიდან აიცილებს ლაბორატორიას ეგზოგენური RNase-ით დაბინძურებისგან.
-სწრაფი სიჩქარე: Foregene Protease-ს აქვს უფრო მაღალი აქტივობა, ვიდრე მსგავსი პროტეაზები, სწრაფად ითვისებს ნიმუშებს;მარტივი ოპერაცია.
- მოსახერხებელი: ცენტრიფუგაცია ხორციელდება ოთახის ტემპერატურაზე და არ არის საჭირო 4°C დაბალი ტემპერატურის ცენტრიფუგაცია ან დნმ-ის ეთანოლის დალექვა.
-უსაფრთხოება: არ არის საჭირო ორგანული რეაგენტის ექსტრაქცია.
-მაღალი ხარისხი: ამოღებულ გენომურ დნმ-ს აქვს დიდი ფრაგმენტები, არ აქვს რნმ, არ არის RNase და უკიდურესად დაბალი იონების შემცველობა, რაც შეიძლება აკმაყოფილებდეს სხვადასხვა ექსპერიმენტების მოთხოვნებს.
მიკრო-ელუციის სისტემა: მას შეუძლია გაზარდოს გენომიური დნმ-ის კონცენტრაცია, რაც მოსახერხებელია ქვედა დინების აღმოჩენისთვის ან ექსპერიმენტისთვის.
ნაკრების აპლიკაცია
შესაფერისია გენომიური დნმ-ის გასაწმენდად შემდეგი ნიმუშებიდან: ბუკალური ნაცხი, FTA ბარათი (სისხლის ლაქები).
შენახვა და შენახვის ვადა
-ამ ნაკრების შენახვა შესაძლებელია 12 თვის განმავლობაში მშრალ პირობებში ოთახის ტემპერატურაზე (15-25°C);თუ საჭიროა მისი შენახვა უფრო ხანგრძლივი დროის განმავლობაში, მისი შენახვა შესაძლებელია 2-8°C ტემპერატურაზე.
შენიშვნა: თუ ინახება დაბალ ტემპერატურაზე, ხსნარი მიდრეკილია ნალექისკენ.გამოყენებამდე აუცილებლად მოათავსეთ ხსნარი კომპლექტში ოთახის ტემპერატურაზე გარკვეული პერიოდის განმავლობაში.საჭიროების შემთხვევაში, წინასწარ გააცხელეთ 37°C წყლის აბაზანაში 10 წუთის განმავლობაში ნალექის გასახსნელად და გამოყენებამდე აურიეთ.
-Foregene Protease ხსნარს აქვს უნიკალური ფორმულა, რომელიც აქტიურია ოთახის ტემპერატურაზე ხანგრძლივი (3 თვე) შენახვისას;მისი აქტივობა და სტაბილურობა უკეთესი იქნება 4°C-ზე შენახვისას, ამიტომ რეკომენდებულია მისი შენახვა 4°C-ზე, გახსოვდეთ არ შეინახოთ -20°C-ზე.
გამწმენდი სვეტი ჩაკეტილია
ამ კომპლექტში, გენომიური დნმ-ის ექსტრაქციის ოპერაციაში, გამწმენდი სვეტი პირდაპირ შეიწოვება ნიმუშის ფერმენტული ლიზისის ნარევზე ცენტრიფუგაციის საფეხურის გარეშე და გამწმენდი სვეტი შეიძლება დაიბლოკოს არასრული ფერმენტიზაციისა და ნიმუშის მაღალი სიბლანტის გამო.
შემდეგი შესაძლო მიზეზები შემდეგია:
1. ქსოვილის ნიმუშების არასრული ფერმენტული მონელება.
რეკომენდაცია: Foregene Protease-ის ნიმუშის დამუშავების დრო შეიძლება სათანადოდ გაგრძელდეს ან სუპერნატანტის მიღება შეიძლება ცენტრიფუგაციის შემდეგ 12,000 rpm (~13,400 × g) 5 წუთის განმავლობაში.
2. ქსოვილის ნიმუშების ან დიდი ქსოვილების გადაჭარბებული გამოყენება.
რეკომენდაცია: ნიმუშში უმჯობესია არ აღემატებოდეს 1 ბუკალური ტამპონი;თუ ნიმუში ძალიან დიდია, შესაბამისად გაზარდეთ ბუფერი ST1, Foregene Protease, ბუფერი ST2-ის დოზა.
3. ნიმუშის სიბლანტე ძალიან მაღალია.
რეკომენდაცია: ნიმუშები შეიძლება სათანადოდ განზავდეს 10 მმ Tris-HCl-ით გენომიური დნმ-ის ექსტრაქციამდე.
4. სისხლის ბარათის ფრაგმენტები შეწოულია.
რეკომენდაცია: სისხლის ლაქების (FTA Card) გენომური ექსტრაქციის მე-6 საფეხურის გარდამავალი ცენტრიფუგაციის დრო სათანადოდ შეიძლება გაგრძელდეს.
დაბალი მოსავლიანობა ან დნმ-ის არარსებობა
ხშირად არსებობს სხვადასხვა ფაქტორები, რომლებიც გავლენას ახდენენ გენომიურ დნმ-ზე, მათ შორის ნიმუშის წარმოშობა, ნიმუშის შენახვის პირობები, ნიმუშის მომზადება, მანიპულირება და ა.შ.
გენომის დნმ-ის მიღება შეუძლებელია ექსტრაქციის დროს
შესაძლო მიზეზები შემდეგია:
1. ნიმუშების არასათანადო შენახვა ან ძალიან დიდი ხნის განმავლობაში შენახვა იწვევს გენომის დნმ-ის დეგრადაციას.
რეკომენდაცია: პირის ღრუს ნაცხი სასურველია იყოს ახლად აღებული და არ არის მიზანშეწონილი კონსერვირებული ნაცხის გამოყენება გენომიური დნმ-ის ექსტრაქციის ოპერაციებისთვის;სისხლის ლაქების ნიმუშებმა უნდა უზრუნველყოს ხარისხის ხარისხი და შენახვის დრო არ უნდა იყოს ძალიან დიდი.
2. ქსოვილის ძალიან მცირე გამოყენებამ შეიძლება გამოიწვიოს შესაბამისი გენომის დნმ-ის ამოღება.
რეკომენდაცია: მიჰყევით ბუკალური ნაცხის აღების ინსტრუქციას საოპერაციო სახელმძღვანელოში და წაშალეთ რაც შეიძლება ბევრჯერ ისე, რომ პირის ღრუს ნაცხზე საკმარისი რაოდენობის უჯრედები მიმაგრდეს გენომიური დნმ-ის ექსტრაქციისთვის;სისხლის ლაქების ნიმუშის ამოღების მიზნით, სისხლის ლაქების ამოჭრის ფართობი შეიძლება სათანადოდ გაიზარდოს.
3. Foregene Protease არასწორად არის დაცული, რაც იწვევს მისი აქტივობის დაქვეითებას ან ინაქტივაციას.
რეკომენდაცია: დაადასტურეთ Foregene Protease-ის შენახვის პირობები ან შეცვალეთ იგი ახალი Foregene Protease-ით ფერმენტული რეაქციისთვის.
4. ნაკრების არასწორად შენახვა ან შენახვის დრო ძალიან დიდია, რაც იწვევს კომპლექტში ზოგიერთი კომპონენტის უკმარისობას.
რეკომენდაცია: შეიძინეთ ახალი ბუკალური ნაცხის დნმ-ის საიზოლაციო ნაკრები შესაბამისი პროცედურებისთვის.
5. ბუფერი WB არ ამატებს აბსოლუტურ ეთანოლს.
რეკომენდაცია: დაადასტურეთ, რომ ბუფერული WB ამატებს აბსოლუტური ეთანოლის სწორ მოცულობას.
6. ელუენტი სწორად არ არის დამატებული სილიკონის ფილაში.
რეკომენდაცია: დაამატეთ 65 °C წინასწარ გახურებული ელუენტის წვეთები სილიკონის მემბრანის შუაში და დატოვეთ ოთახის ტემპერატურაზე 5 წუთის განმავლობაში, რათა გაიზარდოს გამორეცხვის ეფექტურობა.
იზოლირებულია დაბალი მოსავლიანობის გენომური დნმ
შემდეგი შესაძლო მიზეზები შემდეგია:
1. ნიმუშების არასათანადო შენახვა ან ძალიან დიდი ხნის განმავლობაში შენახვა იწვევს გენომის დნმ-ის დეგრადაციას.
რეკომენდაცია: პირის ღრუს ნაცხი სასურველია იყოს ახლად აღებული და კონსერვირებული ნაცხი არ უნდა იქნას გამოყენებული გენომიური დნმ-ის ექსტრაქციისთვის.
2. თუ ქსოვილის ნიმუშის რაოდენობა ძალიან მცირეა, ამოღებული გენომიური დნმ-ის შემცველობა ნაკლები იქნება.
რეკომენდაცია: მიჰყევით ინსტრუქციას პირის ღრუს ნაცხის აღების ინსტრუქციებში საოპერაციო სახელმძღვანელოში, წაშალეთ რაც შეიძლება ბევრჯერ ისე, რომ პირის ღრუს ნაცხზე საკმარისი უჯრედები მიმაგრდეს გენომიური დნმ-ის ექსტრაქციისთვის.
3. Foregene Protease არასწორად არის დაცული, რაც იწვევს მისი აქტივობის დაქვეითებას ან ინაქტივაციას.
რეკომენდაცია: დაადასტურეთ Foregene Protease-ის შენახვის პირობები ან შეცვალეთ იგი ახალი Foregene Protease-ით ფერმენტული რეაქციისთვის.
4. ელუენტის პრობლემები.
რეკომენდაცია: გამორეცხვისთვის გამოიყენეთ ბუფერი EB;თუ იყენებთ ddH2O ან სხვა ელუენტები, დაადასტურეთ, რომ ელუატის pH არის 7.0-8.5 შორის.
5. ელუატი არ არის სწორად დამატებული წვეთით.
რეკომენდაცია: დაამატეთ ელუენტის წვეთები სილიკონის მემბრანის შუაში და დატოვეთ ოთახის ტემპერატურაზე 5 წუთის განმავლობაში, რათა გაიზარდოს გამორეცხვის ეფექტურობა.
6. გამორეცხვის სითხე ძალიან ცოტა გროვდება.
რეკომენდაცია: გამოიყენეთ ელუენტი გენომიური დნმ-ის გამორეცხვისთვის, როგორც ეს საჭიროა ინსტრუქციებში, არანაკლებ 15 μl.
იზოლირებული გენომიური დნმ-ის დაბალი სისუფთავე
გენომური დნმ-ის დაბალმა სისუფთავემ შეიძლება გამოიწვიოს ექსპერიმენტების წარუმატებლობა ან არადამაკმაყოფილებელი შედეგები, როგორიცაა: ფერმენტების გახსნა შეუძლებელია, PCR ვერ მიიღებს საინტერესო გენის ფრაგმენტს და ა.შ.
შესაძლო მიზეზები შემდეგია:
1. ჰეტეროპროტეინით დაბინძურება, რნმ დაბინძურება.
ანალიზი: გამწმენდი სვეტი არ იყო გარეცხილი ბუფერული PW გამოყენებით;ბუფერული PW სარეცხი გამწმენდი სვეტი არ იყო გარეცხილი სწორი ცენტრიდანული სიჩქარით.
რეკომენდაცია: ეთანოლის დამატებამდე დარწმუნდით, რომ არ იყოს ნალექი ზედაპირში;დარწმუნდით, რომ გარეცხეთ გამწმენდი სვეტი ინსტრუქციის მიხედვით და ამ ნაბიჯის გამოტოვება არ შეიძლება.
2. მინარევებისაგან იონური დაბინძურება.
ანალიზი: ბუფერული WB სარეცხი გამწმენდი სვეტი გამოტოვებულია ან გარეცხილია მხოლოდ ერთხელ, რამაც გამოიწვია იონური დაბინძურება.
რეკომენდაცია: დარწმუნდით, რომ გარეცხეთ Buffer WB 2-ჯერ მითითების შესაბამისად, რათა მაქსიმალურად მოიცილოთ ნარჩენი იონები.
3. რნმ ფერმენტის დაბინძურება.
ანალიზი: უცხოური RNase დაემატა ბუფერს;ბუფერული PW სარეცხი ოპერაცია არასწორი იყო, რამაც გამოიწვია RNase ნარჩენები, რომლებიც გავლენას ახდენდნენ რნმ-ის ქვედა დინების ექსპერიმენტულ ოპერაციებზე, როგორიცაა ინ ვიტრო ტრანსკრიფცია.
რეკომენდაცია: Foregene-ის სერიის ნუკლეინის მჟავების საიზოლაციო კომპლექტებს შეუძლიათ რნმ-ის ამოღება RNase-ის დამატებითი დამატების გარეშე, შესაბამისად, ბუკალური ნაცხის/FTA ბარათის დნმ-ის საიზოლაციო ნაკრები არ საჭიროებს RNase-ს დამატებას;დარწმუნდით, რომ მიჰყევით ინსტრუქციას Buffer PW სარეცხი გამწმენდი სვეტისთვის და ამ ნაბიჯის გამოტოვება შეუძლებელია.
4. ეთანოლის ნარჩენი.
ანალიზი: ბუფერმა WB არ ჩაატარა ცარიელი მილის ცენტრიფუგაცია გამწმენდი სვეტის გარეცხვის შემდეგ.
რეკომენდაცია: შეასრულეთ სწორი ცარიელი მილის ცენტრიფუგაციის ოპერაცია ინსტრუქციის მიხედვით.
5. სხვა მინარევებისაგან დაბინძურება.
ანალიზი: შენახული ნიმუშები ან სპეციალური ნიმუშები არ არის წინასწარ დამუშავებული.
რეკომენდაცია: საფუძვლიანად მოამზადეთ ნიმუში ინსტრუქციის მიხედვით.
