ჩვენ მუდმივად გვჯერა, რომ პროდუქტის მაღალი ხარისხი განსაზღვრავს ადამიანის პერსონაჟს, დეტალები წყვეტს პროდუქციის მაღალ ხარისხს, რეალისტურ, ეფექტურ და ინოვაციურ ეკიპაჟის სულისკვეთებასთან ერთად ნუკლეინის მჟავას ექსტრაქციის რეაგენტის ახალი მიწოდებისთვის (შრატი/პლაზმა და პუნქციის ხსნარი) პარტნიორი.ჩვენ მივესალმებით ახალ და ადრინდელ პერსპექტივებს ცხოვრების ყველა სფეროდან, რათა დაგვიკავშირდნენ მომავალი მცირე ბიზნესის ურთიერთქმედებისთვის და ორმხრივი მიღწევების მისაღწევად!
ჩვენ მუდმივად გვჯერა, რომ პროდუქციის მაღალი ხარისხი განსაზღვრავს ადამიანის პერსონაჟს, დეტალები განსაზღვრავს პროდუქციის მაღალ ხარისხს, რეალისტურ, ეფექტურ და ინოვაციურ ეკიპაჟის სულისკვეთებასთან ერთად.ჩინეთის ნუკლეინის მჟავის ექსტრაქციის რეაგენტი და მაგნიტური მძივის მეთოდი, ჩვენი პროდუქცია სარგებლობდა დიდი რეპუტაციით მათი კარგი ხარისხით, კონკურენტული ფასებით და საერთაშორისო ბაზარზე სწრაფი მიწოდებით.ამჟამად, ჩვენ გულწრფელად ველით თანამშრომლობას უფრო მეტ საზღვარგარეთულ მომხმარებლებთან ურთიერთსასარგებლოებზე დაყრდნობით.
ინსტრუქციის სახელმძღვანელოები:Plant Total RNA Isolation Kit Plus ინსტრუქციის სახელმძღვანელო

ჩვენ მუდმივად გვჯერა, რომ პროდუქტის მაღალი ხარისხი განსაზღვრავს ადამიანის პერსონაჟს, დეტალები წყვეტს პროდუქციის მაღალ ხარისხს, რეალისტურ, ეფექტურ და ინოვაციურ ეკიპაჟის სულისკვეთებასთან ერთად ნუკლეინის მჟავას ექსტრაქციის რეაგენტის ახალი მიწოდებისთვის (შრატი/პლაზმა და პუნქციის ხსნარი) პარტნიორი.ჩვენ მივესალმებით ახალ და ადრინდელ პერსპექტივებს ცხოვრების ყველა სფეროდან, რათა დაგვიკავშირდნენ მომავალი მცირე ბიზნესის ურთიერთქმედებისთვის და ორმხრივი მიღწევების მისაღწევად!
ახალი მიწოდება ამისთვისჩინეთის ნუკლეინის მჟავის ექსტრაქციის რეაგენტი და მაგნიტური მძივის მეთოდი, ჩვენი პროდუქცია სარგებლობდა დიდი რეპუტაციით მათი კარგი ხარისხით, კონკურენტული ფასებით და საერთაშორისო ბაზარზე სწრაფი მიწოდებით.ამჟამად, ჩვენ გულწრფელად ველით თანამშრომლობას უფრო მეტ საზღვარგარეთულ მომხმარებლებთან ურთიერთსასარგებლოებზე დაყრდნობით.

სვეტი ჩაკეტილია

სვეტის ჩაკეტვის შემდეგ რნმ-ის გამოსავლიანობა მცირდება ან შეუძლებელიც კი ხდება რნმ-ის გაწმენდა და მიღებული რნმ-ის მასა დაბალია.

საერთო მიზეზების ანალიზი:

1. ნიმუშის შესვენებები არ არის საფუძვლიანი.

ნიმუშის გატეხვა არ იწვევს მთლიანად დნმ-ის გაწმენდის სვეტის დაბლოკვას, ხოლო გავლენას ახდენს რნმ-ის გამოსავლიანობასა და ხარისხზე.ჩვენ გირჩევთ სწრაფ დაფქვას საკმარის თხევად აზოტში ნიმუშების გატეხვისას, შეეცადეთ გაანადგუროთ ნიმუშის უჯრედის კედელი, უჯრედის მემბრანა და სხვა ქსოვილი.პოლიოლის პოლისაქარიდების მცენარეული ნიმუშებისთვის, ჩვენ გირჩევთ გამოიყენოთ Plant Total RNA IOLATION KIT PLUS.

2. გამოყოფილი ნიმუშის ზენატანის შეწოვისას დნმ-ის გამწმენდი სვეტით, შესაძლებელია უჯრედის ფრაგმენტირებული ნალექის ჩასუნთქვა.

აღებული უჯრედის ფრაგმენტული ნალექები გამოიწვევს RNA-ONLY სვეტს, რომელიც დაიბლოკება რნმ-ის ადსორბციის ოპერაციის შესრულებისას (იხ. ნაბიჯი 6).ჩვენ გირჩევთ, ფრთხილად იყოთ ამ სუპერნატანტის შეწოვისას, რათა თავიდან აიცილოთ უჯრედის ნარჩენების შეწოვა.

3. ნიმუშის საწყისი რაოდენობა ძალიან ბევრია.

ნიმუშის გადაჭარბებული გამოყენება გამოიწვევს ნიმუშის არასრულ ფრაგმენტაციას ან უჯრედის არასრულ ლიზას ბუფერული PSL1-ით, რაც გამოიწვევს გამწმენდის სვეტის დაბლოკვას გაწმენდის დროს.მცენარეთა მთლიანი რნმ-ის იზოლაციის ნაკრები თითოეული გაწმენდილი საოპერაციო ნიმუში არის 50 მგ.პოლიოლის პოლისაქარიდების მცენარეული ნიმუშებისთვის, ჩვენ გირჩევთ, სცადოთ Plant Total RNA IOLATION KIT PLUS.

4. ცენტრიფუგის ტემპერატურა ძალიან დაბალია.

რნმ-ის იზოლაციისა და გაწმენდის მთელი პროცესი ტარდება ოთახის ტემპერატურაზე (20-25°გ), გარდა იმისა, რომ ნიმუში ქსოვილი გატეხილია თხევადი აზოტით. ზოგიერთი კრიოგენური ცენტრიფუგის ტემპერატურა 20-ზე დაბალია.℃, რამაც შეიძლება გამოიწვიოს დნმ-ის გამწმენდი სვეტის და/ან მხოლოდ რნმ-ის სვეტის ბლოკირება.თუ ეს მოხდება, დააყენეთ ცენტრიფუგის ტემპერატურა 20-25-ზე℃, დადარწმუნდით, რომ ლიზისური ნარევი და/ან ეთანოლით დამატებული ზენატანი წინასწარ გაცხელდა 37-მდე°C.

არ არის მოპოვებული რნმ ან რნმ-ის გამოსავალი დაბალია

როგორც წესი, არსებობს მრავალი ფაქტორი, რომელიც გავლენას ახდენს აღდგენის ეფექტურობაზე, როგორიცაა: ნიმუშის რნმ-ის შემცველობა, ოპერაციის მეთოდი, გამორეცხვის მოცულობა და ა.შ.

საერთო მიზეზების ანალიზი შემდეგნაირად:

1.ოპერაციის დროს ჩატარდა ყინულის აბაზანა ან დაბალი ტემპერატურის (4°C) ცენტრიფუგაცია.

შემოთავაზება: იმუშავეთ ოთახის ტემპერატურაზე (15-25°გ) მთელი პროცესის განმავლობაში არ გააკეთოთ ყინულის აბაზანა და დაბალი ტემპერატურის ცენტრიფუგაცია.

2. რნმ დეგრადირებულია ნიმუშის არასათანადო შენარჩუნების ან ნიმუშის გრძელვადიანი შენარჩუნების გამო.

რეკომენდაცია: ახლად შეგროვებული ნიმუშები სწრაფად უნდა გაიყინოს თხევად აზოტში და შემდეგ ინახებოდეს -80°C-ზე დიდი ხნის განმავლობაში, თავიდან აიცილოთ ნიმუშების განმეორებითი გაყინვა და გალღობა;ან დაუყოვნებლივ დაასველეთ ნიმუშები რნმ-ის სტაბილიზატორის RNA ხსნარში (ცხოველის ნიმუშები).

3. ნიმუშის არასაკმარისი ფრაგმენტაცია და ლიზისი იწვევს გამწმენდი სვეტის ბლოკირებას.

წინადადება: ქსოვილის დაფქვისას დარწმუნდით, რომ ქსოვილი საკმარისად არის დაფქული და სწრაფად გადაიტანეთ იგი წინასწარ მომზადებულ ბუფერ PSL1-ში (დაადასტურეთ, რომ დამატებულია β-ME-ს სწორი პროპორცია, იხილეთ პროცედურის ნაბიჯი 1).

4.ელუენტი დამატებულია არასწორად.

შემოთავაზება: დარწმუნდით, რომ RNase-ისგან თავისუფალი ddH2O ჩაედინება გამწმენდი სვეტის მემბრანის შუაში.

5. აბსოლუტური ეთანოლის სწორი მოცულობა არ დაემატა ბუფერ PSL2-ს ან ბუფერს PRW2-ს.

წინადადება: გთხოვთ, მიჰყევით ინსტრუქციას, დაამატეთ აბსოლუტური ეთანოლის სწორი მოცულობა ბუფერ PSL2-სა და Buffer PRW2-ში და კარგად აურიეთ ნაკრების გამოყენებამდე.

6. ქსოვილის ნიმუშის რაოდენობა შეუსაბამოა.

შემოთავაზება: გამოიყენეთ 50 მგ ქსოვილი 500 μl ბუფერ PSL1-ზე.ძალიან ბევრი ქსოვილის გამოყენება შეამცირებს მოპოვებული რნმ-ის რაოდენობას და შედეგად მიღებული რნმ-ის სისუფთავე ასევე შემცირდება.ჩვენ მკაცრად გირჩევთ, რომ ნიმუშის საწყისი დოზა არ უნდა აღემატებოდეს 50 მგ-ს რნმ-ის ექსტრაქციის ოპერაციაზე.

7. გამორეცხვის შეუსაბამო მოცულობა ან არასრული ელუცია.

შემოთავაზება: გამწმენდი სვეტის ელუენტის მოცულობა არის 50-200 μl;თუ გამორეცხვის ეფექტი არ არის დამაკმაყოფილებელი, რეკომენდებულია დროის გახანგრძლივება ოთახის ტემპერატურაზე წინასწარ გახურებული RNase-ის გარეშე ddH2O-ს დამატების შემდეგ, როგორიცაა 5-10 წუთი.

8. გამწმენდ სვეტს აქვს ეთანოლის ნარჩენი BufferPRW2-ით გარეცხვის შემდეგ.

წინადადება: თუ ცარიელი მილის ცენტრიფუგირება ხდება 1 წუთის განმავლობაში და ბუფერ PRW2-ში გარეცხვის შემდეგ ჯერ კიდევ რჩება ეთანოლი, შეგიძლიათ გაზარდოთ ცარიელი მილის ცენტრიფუგაციის დრო 2 წთ-მდე, ან განათავსოთ გამწმენდი სვეტი ოთახის ტემპერატურაზე 5 წუთის განმავლობაში, რათა სრულად მოიხსნას ნარჩენი ეთანოლი.

9. ნაკრები არასწორად იქნა გამოყენებული.

შემოთავაზება: პოლიფენოლური პოლისაქარიდების მცენარეული ნიმუშებისთვის, ჩვეულებრივი კომპლექტების გამოყენებით, როგორიცაა Plant Total RNA Isolation Kit, შეიძლება ვერ მივიღოთ იდეალური რნმ-ის ნიმუშები.ჩვენ გირჩევთ გამოიყენოთ Plant Total RNA IsolationKit Plus, რომელიც სპეციალურად შექმნილია პოლიფენოლური პოლისაქარიდის მცენარის ნიმუშებისთვის.სპეციალურად შემუშავებული ნაკრები პოლიფენოლისა და პოლისაქარიდის მცენარის ნიმუშებიდან რნმ-ის მოსაპოვებლად.

OD260/OD280 მნიშვნელობა დაბალია

რნმ-ის გამორეცხვა ddH2O-ით და გამოყენებული სპექტროფოტომეტრის ჩვენებისთვის იწვევს OD260/OD280 დაბალ მნიშვნელობებს.ჩვენ გირჩევთ გამოიყენოთ 10 მმ Tris-HCl, pH 7.5 (რნმ-ის გამორეცხვისთვის RNase-ის გარეშე ddH2O) შედარებით სწორი OD260/OD280 მნიშვნელობების მისაღებად, იხილეთ „რნმ-ის კონცენტრაციისა და გამწმენდის ანალიზი“ მე-19 გვერდზე.

გაწმენდილი რნმ იშლება

გასუფთავებული რნმ-ის ხარისხი დაკავშირებულია ისეთ ფაქტორებთან, როგორიცაა ნიმუშის შენარჩუნება, RNase დაბინძურება და მანიპულირება.

საერთო მიზეზების ანალიზი:

1. ქსოვილის ნიმუშები არ იყო შენახული დროულად შეგროვების შემდეგ.

რეკომენდაცია: თუ ქსოვილის ნიმუშები დროულად არ გამოიყენება შეგროვების შემდეგ, გთხოვთ, დაუყოვნებლივ შეინახოთ ისინი თხევად აზოტში დაბალ ტემპერატურაზე ან გადაიტანეთ -80°C-ზე ხანგრძლივი შენახვისთვის თხევად აზოტში სწრაფი გაყინვის შემდეგ, ან დაუყოვნებლივ ჩაეფლოთ რნმ-ის სტაბილიზატორის RNA ხსნარში (ცხოველის ნიმუშები).რნმ-ის ექსტრაქციისთვის შეეცადეთ გამოიყენოთ ახლად შეგროვებული ქსოვილის ნიმუშები.

2.ქსოვილის ნიმუშების განმეორებითი გაყინვა და დათბობა.

შემოთავაზება: ქსოვილის ნიმუშების შენახვისას უმჯობესია დაჭრათ ისინი შესანარჩუნებლად პატარა ნაჭრებად და გამოყენებისას მათი ნაწილი ამოიღოთ, რათა თავიდან აიცილოთ რნმ-ის დეგრადაცია, რომელიც გამოწვეულია ნიმუშების განმეორებითი გაყინვით და დნობით.

3.RNase შეყვანილია საოპერაციო ოთახში ან არ აცვიათ ერთჯერადი ხელთათმანები, ნიღბები და ა.შ.

შემოთავაზება: რნმ-ის ექსტრაქციის ექსპერიმენტები საუკეთესოდ ჩატარდება რნმ-ის ცალკეულ ოპერაციებში და ლაბორატორიული მაგიდა უნდა გაიწმინდოს ექსპერიმენტამდე, ხოლო ექსპერიმენტის დროს უნდა ატაროთ ერთჯერადი ხელთათმანები და ნიღბები, რათა თავიდან იქნას აცილებული რნმ-ის დეგრადაცია, რომელიც გამოწვეულია RNase-ს შეყვანით.

4. გამოყენებისას რეაგენტი დაბინძურებულია RNase-ით.

შემოთავაზება: ჩაანაცვლეთ მცენარეთა მთლიანი რნმ-ის ექსტრაქციის ნაკრების ახალი სერიით შესაბამისი ექსპერიმენტებისთვის.

5. ცენტრიფუგის მილები და პიპეტების წვერები, რომლებიც გამოიყენება რნმ-ით მანიპულირებისთვის, დაბინძურებულია RNase-ით.

შემოთავაზება: დარწმუნდით, რომ ცენტრიფუგის მილები, პიპეტების წვერები, პიპეტები და ა.შ., რომლებიც გამოიყენება რნმ-ის ექსტრაქციაში, არ შეიცავს RNase-ს.

ინსტრუქციის სახელმძღვანელოები:

Plant Total RNA Isolation Kit Plus ინსტრუქციის სახელმძღვანელო