პრობლემის ანალიზის გზამკვლევი

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

დაბალი მოსავლიანობა ან დნმ-ის არარსებობა

როგორც წესი, არსებობს მრავალი ფაქტორი, რომელიც გავლენას ახდენს გენომიური დნმ-ის გამომუშავებაზე, მათ შორის ნიმუშის წყარო, ნიმუშის ასაკი, ნიმუშის შენახვის პირობები და ოპერაცია.

გენომის დნმ ვერ იქნა მიღებული ექსტრაქციის დროს

1. ქსოვილის ნიმუშები არასწორად ინახება ან ინახება ძალიან დიდი ხნის განმავლობაში, რაც იწვევს გენომიური დნმ-ის დეგრადაციას.

რეკომენდაცია: შეინახეთ ქსოვილის ნიმუშები თხევად აზოტში ან -20°C;შეეცადეთ გამოიყენოთ ახლად შეგროვებული ნიმუშები გენომიური დნმ-ის ექსტრაქციისთვის.

2. ნიმუშის ძალიან მცირე რაოდენობამ შეიძლება გამოიწვიოს შესაბამისი გენომიური დნმ-ის არ ამოღება.

წინადადება: ქსოვილის ნიმუშებისთვის, რომლებიც ინახება დიდი ხნის განმავლობაში ან აქვთ გენომის დნმ-ის მძიმე დეგრადაცია, ქსოვილის ნიმუშების რაოდენობა შეიძლება სათანადოდ გაიზარდოს, რათა მოხდეს მნიშვნელოვანი გენომის დნმ.ნიმუშის რაოდენობა შეიძლება განისაზღვროს დნმ-ის საჭიროებების მიხედვით, მაგრამ ახალი ნიმუში არ უნდა აღემატებოდეს 100 მგ-ს, ხოლო მშრალი ნიმუში არ უნდა აღემატებოდეს 30 მგ-ს.

3. ნიმუში არ არის დაფქული თხევადი აზოტით ან არ არის განთავსებული თხევადი აზოტის შემდეგ ძალიან დიდი ხნის განმავლობაში.

წინადადება: დნმ-ის ექსტრაქციის დროს ნიმუშის სრულად დაფქვა საჭიროა თხევადი აზოტით, რათა მოხდეს უჯრედის კედელი;დაფქვის შემდეგ, გთხოვთ, გადაიტანოთ ნიმუშის ფხვნილი PL1-ზე წინასწარ გახურებულ 65 გრადუსზე°C რაც შეიძლება მალე (როდესაც დაფქული ფხვნილი დნება, გენომიური დნმ დაიწყებს სწრაფად დეგრადაციას).

4. Foregene Protease-ის არასათანადო შენახვა იწვევს აქტივობის შემცირებას ან ინაქტივაციას.

რეკომენდაცია: დაადასტურეთ Foregene Protease-ის შენახვის პირობები ან შეცვალეთ იგი ახალი Foregene Protease-ით ფერმენტული ჰიდროლიზისთვის.

5. ნაკრები არასწორად ინახება ან ინახება ძალიან დიდი ხნის განმავლობაში, რაც იწვევს ნაკრების ზოგიერთი კომპონენტის გაფუჭებას.

რეკომენდაცია: შეიძინეთ მცენარის გენომის დნმ-ის ექსტრაქციის ახალი ნაკრები შესაბამისი ოპერაციებისთვის.

6. ნაკრების არასათანადო გამოყენება.

შემოთავაზება: შეიძინეთ მცენარის დნმ-ის საიზოლაციო ნაკრები, რომელიც ეძღვნება მცენარის გენომის დნმ-ის ექსტრაქციისა და გაწმენდის ნიმუშებს.

7. ბუფერი WB a დამატების გარეშეწყლიანი ეთანოლი.

რეკომენდაცია: დარწმუნდით, რომ დაამატეთ აბსოლუტური ეთანოლის სწორი მოცულობა ბუფერ WB-ში.

8. ელუენტი სწორად არ იყო ჩამოსხმული სილიციუმის მემბრანაზე.

შემოთავაზება: დაამატეთ წინასწარ გახურებული ელუენტი 65 გრადუსზე℃წვეთოვანი სილიკა გელის მემბრანის შუაში და დატოვეთ იგი ოთახის ტემპერატურაზე 5 წუთის განმავლობაში, რათა გაიზარდოს გამორეცხვის ეფექტურობა.

ექსტრაქცია დაბალი მოსავლიანობის გენომური დნმ-ის მისაღებად

1. ნიმუში არასწორად ინახება ან ინახება ძალიან დიდი ხნის განმავლობაში, რაც იწვევს გენომიური დნმ-ის დეგრადაციას.

რეკომენდაცია: შეინახეთ ქსოვილის ნიმუშები -20-ზე℃;შეეცადეთ გამოიყენოთ ახლად შეგროვებული ქსოვილის ნიმუშები გენომიური დნმ-ის ექსტრაქციისთვის.

2. თუ ქსოვილის ნიმუშების რაოდენობა ძალიან მცირეა, ამოღებული გენომიური დნმ ნაკლები იქნება.

შემოთავაზება: ზოგიერთი მცენარის ნიმუში მდიდარია წყლით, მაგალითად, წყლის მცენარეები, როგორიცაა წყალმცენარეები და ა.

3. ნიმუშები არ იყო კარგად დაფქული თხევადი აზოტით ან დარჩა ოთახის ტემპერატურაზე ძალიან დიდი ხნის განმავლობაში დაფქვის შემდეგ.

წინადადება: თხევადი აზოტის დაფქვა უნდა იყოს საკმარისი და ნიმუშის უჯრედის კედელი მაქსიმალურად უნდა იყოს გატეხილი;დაფქვისთანავე, ნიმუშის ფხვნილი უნდა გადავიდეს 65-ზე℃წინასწარ გაცხელებული ბუფერი PL1 შემდეგი ნაბიჯისთვის.

4. არ იყენებთ სწორ კომპლექტს.

რეკომენდაცია: გამოიყენეთ მცენარის დნმ-ის საიზოლაციო ნაკრები მცენარის გენომის დნმ-ის ამოსაღებად და გასაწმენდად.

5. Foregene Protease-ის არასათანადო შენახვა იწვევს აქტივობის შემცირებას ან ინაქტივაციას.

რეკომენდაცია: დაადასტურეთ Foregene Protease-ის შენახვის პირობები ან შეცვალეთ იგი ახალი Foregene Protease-ით ფერმენტული ჰიდროლიზისთვის.

6. ელუენტის პრობლემა

რეკომენდაცია: გთხოვთ გამოიყენოთ ბუფერი EB გამორეცხვისთვის;თუ იყენებთ ddH₂O ან სხვა ელუენტები, დარწმუნდით, რომ ელუენტის pH არის 7.0-8.5 შორის.

7. ელუენტი სწორად არ არის წვეთოვანი

შემოთავაზება: გთხოვთ, დაამატეთ ელუციის წვეთი სილიციუმის მემბრანის შუაში და დატოვეთ ოთახის ტემპერატურაზე 5 წუთის განმავლობაში, რათა გაზარდოთ გამორეცხვის ეფექტურობა.

8. ელუენტის მოცულობა ძალიან მცირეა

წინადადება: გთხოვთ, გამოიყენოთ ელუენტი გენომიური დნმ-ის გამორეცხვისთვის ინსტრუქციის მიხედვით, არანაკლებ 100μl.

მოპოვებული გენომიური დნმ დაბალი სისუფთავით

გენომის დნმ-ის დაბალი სისუფთავე გამოიწვევს ქვედა დინების ექსპერიმენტების წარუმატებლობას ან ცუდ ეფექტს, როგორიცაა: ფერმენტის დაჭრა და სამიზნე გენის ფრაგმენტის მიღება შეუძლებელია PCR-ით.

1. სხვადასხვა ცილის დაბინძურება, რნმ-ის დაბინძურება.

ანალიზი: ბუფერული PW არ იყო გამოყენებული სვეტის გასარეცხად;ბუფერული PW არ იყო გამოყენებული სვეტის გასარეცხად ცენტრიფუგაციის სწორი სიჩქარით.

წინადადება: შეეცადეთ უზრუნველყოთ, რომ არ იყოს ნალექი სუპერნატანში, როდესაც სუპერნატანი გადადის სვეტში;დარწმუნდით, რომ გარეცხეთ გამწმენდი სვეტი Buffer PW-ით ინსტრუქციის მიხედვით და ამ ნაბიჯის გამოტოვება შეუძლებელია.

2. მინარევებისაგან იონური დაბინძურება.

ანალიზი: ბუფერული WB სარეცხი სვეტი იყო გამოტოვებული ან მხოლოდ ერთხელ გარეცხილი, რამაც გამოიწვია ნარჩენი იონური დაბინძურება.

რეკომენდაცია: აუცილებლად დაიბანეთ ორჯერ Buffer WB-ით ინსტრუქციის მიხედვით, რათა მაქსიმალურად მოიცილოთ ნარჩენი იონები.

3. RNase დაბინძურება.

ანალიზი: ეგზოგენური RNase ემატება ბუფერს;არასწორი რეცხვის ოპერაცია ბუფერულ PW-ში გამოიწვევს ნარჩენ RNase-ს და გავლენას მოახდენს რნმ-ის ქვედა დინების ექსპერიმენტულ ოპერაციებზე, როგორიცაა ინ ვიტრო ტრანსკრიფცია.

წინადადება: Foregene-ის სერიის ნუკლეინის მჟავების ექსტრაქციის კომპლექტებს შეუძლიათ რნმ-ის ამოღება დამატებითი RNase-ს გარეშე და მცენარეთა დნმ-ის საიზოლაციო ნაკრების ყველა რეაგენტს არ სჭირდება RNase;დარწმუნდით, რომ გარეცხეთ გამწმენდი სვეტი Buffer PW-ით ინსტრუქციის მიხედვით და ამ ნაბიჯის გამოტოვება შეუძლებელია.

4. ეთანოლის ნარჩენები.

ანალიზი: გამწმენდი სვეტის ბუფერი WB-ით გარეცხვის შემდეგ, ცარიელი მილის ცენტრიფუგაცია არ ჩატარებულა.

რეკომენდაცია: მიჰყევით ინსტრუქციას ცარიელი მილის სათანადო ცენტრიფუგაციისთვის.

Ინსტრუქციის სახელმძღვანელო:

მცენარეთა დნმ-ის იზოლაციის ნაკრები ინსტრუქციის სახელმძღვანელო