პირდაპირი RT-qPCR ნაკრები III
ნაკრების აღწერა:
◮პირდაპირი RT-qPCR ნაკრები, Foregene-ის მიერ შემუშავებული Foreasy Reverse Transcriptase და Foreasy HS Taq დნმ პოლიმერაზას გამოყენებით, უნიკალური რეაქციის ბუფერით, ხდის ამ კომპლექტს ძლიერ წინააღმდეგობასა და თავსებადობას და მას შეუძლია პირდაპირ შეამოწმოს რეაქცია Foregene Lysis სისტემის შაბლონად გამოყენებით.ამ ნაკრების გამოყენება შესაძლებელია COVID-19-ის ნუკლეინის მჟავების აღმოჩენის ნაკრებისა და სხვა პათოგენური ბაქტერიების ნუკლეინის მჟავების აღმოჩენის ნაკრების შემუშავებისთვის.
აღწერა
პირდაპირი RT-qPCR ნაკრები უზრუნველყოფს ცალკე შეფუთულ RT-qPCR ბუფერს (Foreasy HS Taq დნმ პოლიმერაზას შერეული) და მაღალეფექტურსForeasy Reverse Transcriptase (MMLV),რაც მოსახერხებელია უკანა ნაწილის ნაკრების შესაქმნელად და სისტემის რეგულირებისთვის, მარტივი გადამოწმების ფარგლებში.
პირდაპირი RT-qPCR ნაკრები, Foregene-ის მიერ შემუშავებული Foreasy Reverse Transcriptase და Foreasy HS Taq დნმ პოლიმერაზას გამოყენებით, უნიკალური რეაქციის ბუფერით, ხდის ამ კომპლექტს ძლიერ წინააღმდეგობასა და თავსებადობას და მას შეუძლია პირდაპირ შეამოწმოს რეაქცია Foregene Lysis სისტემის შაბლონად გამოყენებით.ამ ნაკრების გამოყენება შესაძლებელია COVID-19-ის ნუკლეინის მჟავების აღმოჩენის ნაკრებისა და სხვა პათოგენური ბაქტერიების ნუკლეინის მჟავების აღმოჩენის ნაკრების შემუშავებისთვის.
ეს ნაკრები შეიძლება იყოს უშუალოდ IVD პროდუქტის კომპონენტი, მარტივად და სწრაფად.მას მხოლოდ მარტივი გადამოწმება სჭირდება, ხელახლა განვითარების გარეშე.
სპეციფიკაციები
500T, 50000T
ნაკრების კომპონენტები
| ნაკრების შიგთავსი (20 μL რეაქციის სისტემა) | IM-05111-03 | IM-05112-03 |
| 500 ტ | 50000 ტ | |
| Foreasy რევერსი ტრანსკრიპტაზა(200 U/μL) | 50 მლ× 1 | 1 მლ× 5 |
| 2× პირდაპირი qPCRმიქს-თაყმანი | 1 მლ × 5 | 500 მლ× 1 |
| ინსტრუქცია | 1 | 1 |
საოპერაციო ნაბიჯები
პასუხი: მოამზადეთ შაბლონი და რეაგენტი
1. მოამზადეთ მზა რნმ-ის შაბლონი (რეკომენდებულია გამოიყენოთ Foregene Total RNA Isolation Kit სერიის ნაკრები რნმ შაბლონის ამოსაღებად და გასაწმენდად) ან კრეკინგის პროდუქტის ნიმუში (რეკომენდებულია Foregene Lysis სისტემის გამოყენება), სპეციფიკური პრაიმერები (10 μM) და სხვა შესაბამისი სახარჯო მასალები, ინსტრუმენტი.
2. მოათავსეთ 2× Direct RT-qPCR ბუფერი, RNase-Free ddH2O და 20× ROX Reference Dye (თუ ეს საჭიროა) ყინულის კოლოფში, რათა ისინი ბუნებრივად დნება და ნაზად აურიეთ.
B: მოამზადეთ RT-qPCR სისტემა
მიიღეთ რეაქციის სისტემის რეაქციის ბუფერის მოცულობის ნახევარი (მაგალითად, თუ სისტემის მოცულობა არის 20 μL, მან უნდა მიიღოს 10 μL 2× პირდაპირი RT-qPCR ბუფერი). ამისთვისფერმენტის შესაბამისი რაოდენობა, ჩვენ ამას ვთავაზობთM-MLV: 10-30 U/20 μL რეაქციის სისტემა,ტაქდნმ პოლიმერაზა:1-2 U/20 μL რეაქციის სისტემაეს არის ჩვენი წინადადება, თქვენ უნდა შეამოწმოთ და დაარეგულიროთ), დაამატეთ რნმ-ის შაბლონი, სპეციფიკური პრაიმერები და ზონდები და დაამატეთ RNase-ის გარეშე ddH2O-დან 20 მლ-მდე.RT-qPCR რეაქციის სისტემის სპეციფიკური მომზადება შეიძლება მოხსენიებული იყოს შემდეგ ცხრილში 1.
ცხრილი 1: მოამზადეთ RT-qPCR სისტემა
| Კომპონენტი | მოცულობა | საბოლოო კონცენტრაცია |
| 2× პირდაპირი RT-qPCR ბუფერი | 10 მლ | 1× |
| Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq დნმ პოლიმერაზა | 1-2 U | |
| წინა პრაიმერი (10 μM) | 0.8 მლ | 50-900ნმ |
| უკუ პრაიმერი (10 μM) | 0.8 მლ | 50-900ნმ |
| ზონდი (4 მკმ) | 1 მლ | 200 ნმ |
| შაბლონი (რნმ ან ლიზატი) | X μL | |
| 20× ROX Reference საღებავი | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
| მთლიანი მოცულობა | 20 მლ |
შენიშვნა: Forward Primer და Reverse Primer არის სამიზნე გენის სპეციფიკური პრაიმერი.qPCR სისტემის კორექტირება შესაძლებელია პრაქტიკული ექსპერიმენტული და PCR მოდელების მიხედვით.ჩვენ გირჩევთ 400nM პრაიმერების უმეტესობის საბოლოო კონცენტრაციისთვის.დაარეგულირეთ კონკრეტული პრაიმერების და ზონდების მოცულობა მომზადებული კონცენტრაციისა და რეკომენდებული საბოლოო კონცენტრაციის მიხედვით, გთხოვთ.
1*: აირჩიეთ ROX Reference Dye-ის შესაფერისი საბოლოო კონცენტრაცია სხვადასხვა რაოდენობრივი PCR ინსტრუმენტების მიხედვით.ჩვეულებრივი რაოდენობრივი PCR ინსტრუმენტების ROX Reference საღებავის ოპტიმალური კონცენტრაცია ნაჩვენებია შემდეგ ცხრილში:
| რაოდენობრივი PCR ინსტრუმენტები | ROX Reference Dye-ის საბოლოო კონცენტრაცია |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/ნაბიჯი პირველი,და ა.შ. | 1× (მაგალითად, დაამატეთ 1μl 20×ROX Reference Dye 20 μL რეაქციის სისტემაში) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P და Mx4000 და ა.შ. | 0,5× (მაგალითად, დაამატეთ 0,5 μl 20×ROX სარეაქციო საღებავი 20 μL რეაქციის სისტემაში) |
| Roche PCR ინსტრუმენტი, Bio-Rad PCR ინსტრუმენტი, Eppendorf რაოდენობრივი PCR ინსტრუმენტი და ა.შ. | ROX Reference საღებავის გარეშე |
შენახვა და შენახვის ვადა
ნაკრები უნდა ინახებოდეს -20 ± 5℃ ტემპერატურაზე.ის დაუყოვნებლივ უნდა ინახებოდეს -20℃ თერმოსტატულ მაცივარში.ვარგისიანობის ვადა 2 წელია, თუ ის შესანახ მდგომარეობაშია.
